靈芝生物富硒及富硒靈芝硒蛋白的分離純化和抗氧化性研究.pdf

1、靈芝是中國傳統(tǒng)的藥食珍品,硒則是人體的必需微量元素,以靈芝子實體進行生物富硒的研究,國外未有報導,國內(nèi)也較少見而且尚待深入.因此,該實驗對填補基礎領域研究的空白、探索應用領域新的補硒資源和更有效的生物活性因子有著重要的意義.該論文的主要實驗結果如下:培養(yǎng)基中硒的濃度為200~250μg/g時,可以獲得產(chǎn)量及富硒量較為理想的富硒靈芝子實體;硒可以明顯提高靈芝中多糖、蛋白質(zhì)以及氨基酸的含量,但并不改變靈芝蛋白質(zhì)的分布和蛋白質(zhì)中氨基酸的組成配

2、比;礦質(zhì)元素中硒有極明顯的增加,銅、鉬等有一定量的增加,而鐵、鈣、鍶等則有所下降.在富硒靈芝子實體中,80﹪以上的硒以有機硒形式存在,并主要以非硒代蛋氨酸(硒代半胱氨酸)的形式與蛋白質(zhì)結合,其中水溶性蛋白和堿溶性蛋白是靈芝結合硒的主要蛋白,總結合硒量占蛋白硒的75﹪以上;此外,應用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離富硒靈芝子實體中的含硒蛋白組分,并采用氫化物原子熒光法(HGAFS)測定蛋白或肽鏈條帶中硒的含量,結果表明:

3、在分辨出的13條蛋白條帶中,分子量在8.709~142.53kDa的蛋白或肽鏈均結合了不同程度的硒,但硒主要分布在分子量不超過16kDa的蛋白或肽鏈中.富硒靈芝堿溶性蛋白的等電點初步確定在pH 4.2左右,抗氧化活性在60℃以下穩(wěn)定,蛋白先經(jīng)過葡聚糖凝膠(Sephadex G-100)分子篩層析,更進行強陰離子交換樹脂(Biorad High Q)離子交換層析后,所獲得的富硒靈芝含硒蛋白結合的硒量最高,每克蛋白含硒可高達5.48mg.順

4、磁共振自旋捕集技術(EPR)和CuSO<,4>-Phen-Vc-H<,2>O<,2>-DNA體系微弱發(fā)光法清除羥自由基(·OH)和超氧自由基(O<,2><'->·)的實驗以及抗DNA損傷作用的研究發(fā)現(xiàn),富硒靈芝蛋白和富硒靈芝多糖均具有較強地清除·OH和O<,2><'->的活性,抗氧化作用強于對照—普通靈芝蛋白和普通靈芝多糖;硒與靈芝蛋白之間具有抗氧化協(xié)同作用,但硒與靈芝多糖以及靈芝蛋白與靈芝多糖之間則無此協(xié)同作用但卻可以彼此增強抗氧化的

5、活性;富硒靈芝蛋白為兼型抗氧化劑,能明顯抑制和延遲DNA的氧化損傷發(fā)光,而且蛋白濃度與延遲時間之間存在著顯著的線性依賴關系.此外,大鼠紅細胞生物模型實驗的結果表明,富硒靈芝蛋白能夠劑量依賴性地抑制過氧化特丁烷(TBHP)引起的大鼠紅細胞溶血、減少紅細胞過氧化脂質(zhì)產(chǎn)物—丙二醛(MDA)的生成,以及抑制高鐵血紅蛋白的產(chǎn)生和聚積,保護紅細胞中的氧合血紅蛋白免受氧化損傷.綜上所述,富硒靈子實體是一種理想的補硒資源,其中主要賦存硒的靈芝蛋白更是靈