富硒靈芝液體深層培養(yǎng)及營(yíng)養(yǎng)成分分析.pdf

1、靈芝是我國(guó)珍貴的藥用真菌，硒是人體必需的微量元素。以靈芝菌絲體作為載體，利用活化硒礦水作為硒源，進(jìn)行生物富硒的研究在國(guó)內(nèi)外鮮有報(bào)道。因此，本研究對(duì)于探索新的生物富硒途徑、提供新的有機(jī)硒資源具有重要意義。本研究的主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及研究結(jié)論如下： 首先，通過(guò)快速登高法和響應(yīng)面分析法得出活化硒礦水為唯一硒源條件下靈芝深層培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基組成：葡萄糖2.13％、麩皮汁3.96％、KH2PO40.3％和MgSO4·7H2O0.09％。在優(yōu)化條

2、件下，得到的菌絲體生物量在18g·L-1左右，菌絲體中總硒含量在150μg·g-1以上，富硒率達(dá)到55％。 其次，通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化了活化天然硒礦粉制備含硒水溶液的工藝條件：邊攪拌邊將300g硒礦粉添加到600mL0.6mol·L-1氨水中氨解72h，然后加熱至近干并重新補(bǔ)充氨水氨解兩次，再用pH8.0的磷酸緩沖液進(jìn)行磷酸化處理后，超聲波提取0.5h；在優(yōu)化條件下硒礦水中硒濃度可以達(dá)到50μg.mL-1；混合硒源(活化硒礦水+亞硒

3、酸鈉)試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)培養(yǎng)基中添加15μg·mL-1的硒(5μg·mL-1來(lái)自于硒礦水、10μg·mL-1來(lái)自亞硒酸鈉)時(shí)，菌絲體生物量穩(wěn)定在18g·L-1左右，總硒含量可提高到260μg·g-1左右，富硒率在30％以上。 再次，在搖瓶實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行了5L發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)并對(duì)發(fā)酵罐參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。通過(guò)單因素試驗(yàn)、正交試驗(yàn)和發(fā)酵罐在線(xiàn)控制方法，優(yōu)化得到靈芝在發(fā)酵罐中生長(zhǎng)的最優(yōu)條件為：培養(yǎng)溫度28℃，通氣量1.2L·min-1，初始

4、pH6.5，攪拌速度120r·min-1，接種量10％，分階段pn控制值5.0，DO值(與轉(zhuǎn)速串聯(lián))6％，此種條件下菌絲體生物量可達(dá)到14.91g·L-1，總硒含量354μg·g-1，富硒率35.2％。 最后，測(cè)定了所培養(yǎng)靈芝中的營(yíng)養(yǎng)素含量并分析了硒的存在狀態(tài)。富硒靈芝菌絲體中蛋白質(zhì)含量為16.28％，遠(yuǎn)高于普通靈芝的12.31％；原子吸收測(cè)定結(jié)果表明富硒靈芝中Ca、Fe、Zn、Se的含量分別為398.1μg·g-1、338.7