視黃醇X受體α依賴的HBV微染色體重塑與病毒復(fù)制.pdf

1、背景和目的:乙型肝炎病毒(HBV)共價閉合環(huán)狀DNA(HBVcccDNA)、組蛋白和非組蛋白共同作用組裝成病毒微染色體。視黃醇X受體α(RXRα)是作為一種肝細胞核轉(zhuǎn)錄因子，參與了HBV復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。本研究致力于在RXRα已被證實與病毒復(fù)制具有直接相關(guān)的基礎(chǔ)上探索其是否并如何參與到HBVcccDNA微染色質(zhì)重塑，期望對新型抗病毒藥物的研究提供一些理論及實驗基礎(chǔ)。
　　方法:線性HBV全長基因組DNA轉(zhuǎn)染HepG2細胞，建立HB

2、V非載體細胞復(fù)制模型;與RXRα真核表達質(zhì)粒(pRs-hRXRα)和shRNA載體分別共轉(zhuǎn)染建立RXRα高表達及基因沉默HBV復(fù)制系統(tǒng)。在三種不同系統(tǒng)下，采用HBVcccDNA染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)技術(shù)聯(lián)合實時定量PCR方法，進行RXRα依賴的HBV復(fù)制與病毒微染色質(zhì)重塑的相關(guān)性探索。
　　結(jié)果:
　　(1)線性HBV全長基因組DNA轉(zhuǎn)染后成功啟動了HepG2細胞內(nèi)完整的HBV復(fù)制與轉(zhuǎn)錄活動，表明了HBV非載體細胞復(fù)制模

3、型的成功建立。
　　(2) RXRα直接結(jié)合到HBV微染色質(zhì)上從而對病毒復(fù)制與轉(zhuǎn)錄活動發(fā)揮重要的調(diào)控作用。
　　(3) HBV cccDNA微染色質(zhì)中檢測到組蛋白招募和乙酰化的動態(tài)變化。
　　(4) RXRα基因過表達及基因沉默直接影響了HBV微染色質(zhì)中組蛋白結(jié)合及其乙?；?，且與HBV復(fù)制明顯相關(guān)。
　　結(jié)論:我們的研究證實了RXRα對HBV體外復(fù)制活動的調(diào)控作用以及對HBV微染色質(zhì)重塑的重要影響，對于作用于