視黃醇X受體出核抑制對神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　檢測AD病理狀態(tài)下N2a細(xì)胞、小鼠海馬組織RXRα亞細(xì)胞定位及神經(jīng)元過度凋亡的改變，利用RXRα配體9-cis-RA抑制RXRα出核，研究這種抑制作用對神經(jīng)元細(xì)胞過度凋亡的影響。
　　方法：
　　以分別經(jīng)過Aβ、Aβ及9-cis-RA共處理的N2a細(xì)胞、C57BL/6小鼠及其對照組為研究對象。N2a細(xì)胞采用細(xì)胞培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)，按照實(shí)驗(yàn)要求和目的分組培養(yǎng)以及細(xì)胞搜集與處理，包括蛋白提取、核質(zhì)分離與細(xì)胞爬片等

2、；C57BL/6小鼠根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和目的分組進(jìn)行藥物海馬定位注射并在規(guī)定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行飼養(yǎng)，并及時(shí)取腦，對海馬組織進(jìn)行蛋白提取、核質(zhì)分離與制作腦切片等。N2a細(xì)胞應(yīng)用Western Blot、實(shí)時(shí)熒光定量PCR及核質(zhì)分離等技術(shù)分別檢測RXRα、Nur77蛋白總含量、mRNA表達(dá)水平及其在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中含量的變化，并通過細(xì)胞免疫熒光染色技術(shù)觀察RXRα、Nur77亞細(xì)胞定位；應(yīng)用MTT、DAPI染色、流式細(xì)胞儀以及Bcl-2與Bax含量檢測等

3、方法觀察細(xì)胞凋亡情況，并與上述RXRα、Nur77亞細(xì)胞定位關(guān)聯(lián)。C57BL/6小鼠應(yīng)用Western Blot及核質(zhì)分離等技術(shù)檢測海馬區(qū)RXRα、Nur77蛋白總含量及其在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中含量的變化，并在小鼠腦切片海馬區(qū)通過免疫熒光染色技術(shù)觀察RXRα、Nur77亞細(xì)胞定位；應(yīng)用DAPI染色以及Bcl-2與Bax含量檢測等方法觀察細(xì)胞凋亡情況，并與上述RXRα、Nur77亞細(xì)胞定位關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)果：
　　N2a細(xì)胞經(jīng)Aβ處

4、理24h后，RXRα和Nur77的mRNA表達(dá)水平及蛋白量均無明顯變化，但RXRα、Nur77在細(xì)胞質(zhì)中的含量與分布增多，RXRα與Nur77分別從對照組的5.26％、4.85%增至Aβ25-35處理組的42.2%、35.5%；細(xì)胞凋亡率從對照組4.36%增至Aβ25-35處理組15.1%。而N2a細(xì)胞經(jīng)9-cis-RA預(yù)先處理12h，再經(jīng)Aβ處理24h后，與未經(jīng)9-cis-RA預(yù)先處理的對照組比較，RXRα和Nur77的mRNA表達(dá)水

5、平及總蛋白量均無明顯變化，但RXRα、Nur77在細(xì)胞質(zhì)中的含量與分布明顯減少，分別從對照組的42.2%、35.5%減少至9-cis-RA處理組的6.67%、5.44%；細(xì)胞凋亡率從對照組15.1%減至9-cis-RA處理組5.31%。C57BL/6小鼠經(jīng)Aβ處理24h后，RXRα、Nur77總蛋白量變化無明顯差異，但RXRα、Nur77在細(xì)胞質(zhì)中的含量與分布增多，分別從對照組的26.1%、11.1%增至Aβ25-35處理組的59.2%

6、、73.7%；細(xì)胞凋亡也明顯增多。而C57BL/6小鼠經(jīng)9-cis-RA預(yù)先處理12h，再經(jīng)Aβ處理24h后，與未經(jīng)9-cis-RA預(yù)先處理的對照組比較，RXRα、Nur77總蛋白量變化無明顯差異，但RXRα、Nur77在細(xì)胞質(zhì)中的含量與分布減少，分別從對照組的59.2%、73.7%減少至9-cis-RA處理組的30.2%、19.8%；細(xì)胞凋亡也明顯相應(yīng)減少。
　　結(jié)論：
　　Aβ處理可導(dǎo)致RXRα、Nur77出核；Aβ處理