冠突散囊菌產(chǎn)色素類物質(zhì)的初步研究.pdf

1、茯磚茶的茶湯呈現(xiàn)透亮的橙紅色，具有降血脂血糖、減肥助消化及抗氧化等保健功效。冠突散囊菌是茯磚茶發(fā)花過程中形成的優(yōu)勢菌株，其代謝產(chǎn)物種類繁多，有色素類、胞外多糖類、酶類、氨基酸類等，前期實驗研究發(fā)現(xiàn)，色素類物質(zhì)具有一定的生理活性，因此具有很高的研究價值。
　　本研究以陜西茯磚茶中提取的冠突散囊菌為菌種，采用麩皮對其進(jìn)行固體培養(yǎng)，通過超聲輔助提取等方法對冠突散囊菌色素進(jìn)行提取并對提取條件進(jìn)行優(yōu)化，通過TLC、HPLC等方法對提取出的色

2、素進(jìn)行分離純化，利用紫外、紅外光譜等方法對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步探究，從而推測出可能的色素類型，為藥品和保健食品的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。本研究的內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1.在冠突散囊菌固體培養(yǎng)工藝條件優(yōu)化的基礎(chǔ)上，考察了菌體生長期間代謝產(chǎn)物中黃色素產(chǎn)量的變化情況，結(jié)果表明:黃色素代謝產(chǎn)物的變化趨勢為先升高，后降低，固體培養(yǎng)至第五天時，冠突散囊菌代謝的黃色素產(chǎn)量最大。
　　2.以石油醚為最佳提取溶劑，優(yōu)化了超聲輔助提取法和有機溶劑浸提法的工藝條

3、件，結(jié)果如下，超聲輔助提取法的最佳提取工藝為:料液比1∶20，溫度50℃，時間20min。最高得率可達(dá)1.34％左右。有機溶劑浸提法的最佳提取工藝為:料液比1∶30，溫度60℃，時間1h。最高得率可達(dá)0.83％左右。結(jié)果表明:超聲輔助提取法所用時間短，提取效率高，減少了一些非目標(biāo)物質(zhì)的溶出，極大降低了雜質(zhì)的干擾，提取效果明顯優(yōu)于有機溶劑浸提法。
　　3.利用薄層色譜、高效液相色譜等方法對冠突散囊菌色素提取液進(jìn)行分離純化。
　

4、　(1)選擇了16種不同極性的展開劑對冠突散囊菌色素提取濃縮液中的成分進(jìn)行初步分離，結(jié)果表明:展開劑石油醚∶乙酸乙酯=1∶1(v/v)能分離出兩個主要斑點，分別是Rf值為0.882的黃色斑點和Rf值為0.776的紅色斑點。分離效果的重現(xiàn)性良好，且兩個斑點的Rf值相差比較大，有利于黃色斑點的收集，將收集到的黃色斑點記為黃色素。
　　(2)將上述黃色斑點即黃色素收集后，利用展開劑石油醚∶丙酮=9∶1(v/v)對其進(jìn)行二次分離，結(jié)果表明

5、:展開劑石油醚∶丙酮=9∶1(v/v)能將黃色素再次分開為三個主要斑點，其Rf值分別為0.513、0.462、0.423，分離效果的重現(xiàn)性良好，且三個斑點的Rf值相差比較大，有利于三種組分的分開收集，收集到的三種組分分別記為:黃色素組分Ⅰ、黃色素組分Ⅱ、黃色素組分Ⅲ。
　　(3)采用高效液相色譜法對黃色素組分Ⅰ、黃色素組分Ⅱ、黃色素組分Ⅲ進(jìn)行進(jìn)一步的分離，結(jié)果表明:黃色素組分Ⅰ在流動相甲醇∶水=90∶10(v/v)的洗脫下，分離圖

6、譜上出現(xiàn)了1個主要物質(zhì)峰，其保留時間為15.651min;黃色素組分Ⅱ在流動相甲醇∶水=95∶5(v/v)的洗脫下，分離圖譜上出現(xiàn)了2個主要物質(zhì)峰，其保留時間分別為6.69min、16.296min;黃色素組分Ⅲ在流動相甲醇∶水=95∶5(v/v)的洗脫下，分離圖譜上同樣出現(xiàn)了2個主要物質(zhì)峰，其保留時間分別為6.605min、15.038min。
　　4.利用薄層色譜、紫外-可見光譜、紅外光譜等方法對黃色素與番茄紅素、β-胡蘿卜素

7、、苯甲酸三種對照品進(jìn)行對比性探究，推測黃色素的結(jié)構(gòu)類型。
　　(1)利用薄層色譜法，將黃色素與番茄紅素、β-胡蘿卜素對照品進(jìn)行對比性驗證，展開劑為石油醚∶丙酮=3∶1，結(jié)果表明:番茄紅素的Rf值為0.923，β-胡蘿卜素對照品的R值為0.962，黃色素樣品斑點的Rf值集中在0.610左右，由此可知，三者的Rf值有明顯的差別，因此推測黃色素與番茄紅素、β-胡蘿卜素不是同一類物質(zhì)。
　　(2)利用紫外-可見光譜法在300-600

8、nm范圍內(nèi)進(jìn)行波長掃描，對黃色素與番茄紅素、β-胡蘿卜素、苯甲酸三種對照品進(jìn)行對比性驗證，結(jié)果表明:番茄紅素有三個特征吸收峰，分別為444nm、470nm、502nm;β-胡蘿卜素有兩個特征吸收峰，分別為450nm、478nm;苯甲酸有兩個特征吸收峰，分別為285nm、388nm;黃色素有一個特征吸收峰為398nm，其中的黃色素組分Ⅰ有一個特征吸收峰為389nm，黃色素組分Ⅱ有兩個特征吸收峰，分別為330nm、390nm，黃色素組分Ⅲ有

9、兩個特征吸收峰，分別為330nm、397nm。其中黃色素組分Ⅰ、Ⅱ分別在389nm、390nm處的吸收峰與苯甲酸在388nm處的吸收峰基本吻合，因此推測黃色素與苯甲酸含有相同的官能團(tuán)，此處的特征吸收峰可能是由苯樣結(jié)構(gòu)所引起的。
　　(3)利用紅外光譜法對黃色素與番茄紅素、β-胡蘿卜素、苯甲酸三種對照品進(jìn)行對比性驗證，結(jié)果表明:番茄紅素含有的官能團(tuán)有C=C、-CH2-、-CH3;β-胡蘿卜素含有的官能團(tuán)有C-H、C=C、-CH3、-