鹵醇脫鹵酶轉(zhuǎn)化特定底物研究.pdf

1、脫鹵酶又叫去鹵化酶，是可以催化碳鹵鍵水解斷裂產(chǎn)生相應(yīng)的醇和離子的酶。現(xiàn)在已經(jīng)知道的脫鹵酶的種類主要有5種，分別是烷基脫鹵酶，鹵代酸脫鹵酶，4-氯苯甲酰-輔酶A脫鹵酶，鹵代醇脫鹵酶，3-鹵丙烯酸脫鹵酶。脫鹵酶的作用是能夠降解環(huán)境中的很多鹵化污染物，并且還能夠介導(dǎo)很多有機(jī)鹵化物脫鹵反應(yīng)，使其成為重要的藥物中間體。因此，脫鹵酶長期以來一直是人們研究的熱點(diǎn)之一。
　　本文以特定的底物對實驗室現(xiàn)有的菌株進(jìn)行篩選，然后將篩選到的菌株進(jìn)行鑒定，

2、對產(chǎn)脫鹵酶的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，脫鹵酶酶活的測定，進(jìn)行放大實驗。
　　首先是以1,3-二氯丙醇為底物，從實驗室保藏的菌株中進(jìn)行篩選，篩選到一株對底物轉(zhuǎn)化率比較高的菌株。然后對這株轉(zhuǎn)化率比較高的菌株進(jìn)行鑒定，鑒定結(jié)果為放射形土壤桿菌。然后對轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，分別確定了最佳碳源、氮源、混合磷酸鹽。對發(fā)酵條件的優(yōu)化分別從裝液量、種子培養(yǎng)時間、接種量、發(fā)酵溫度、初始 pH值，搖床轉(zhuǎn)速、轉(zhuǎn)化時間、底物添加量等幾個方面進(jìn)行了優(yōu)化。

3、最優(yōu)轉(zhuǎn)化條件如下：最佳碳源為蔗糖，最佳濃度為45 g/L；最佳氮源為蛋白胨，最佳濃度為10 g/L；混合磷酸鹽（磷酸氫二銨和磷酸氫二鉀）為2.6g/L，裝液量為50 mL/250 mL，接種種齡為16 h，接種量為6％，最佳的底物添加量為40 mg/mL，最適培養(yǎng)溫度為30℃，搖床轉(zhuǎn)速為160 r/min，培養(yǎng)基初始pH為7.0，轉(zhuǎn)化時間為48 h；通過底物溶解方式的優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)使用乙醇溶解的時候轉(zhuǎn)化率最高，所以確定溶解方式為用乙醇溶解。