Burkholderia thailandensis E264生產(chǎn)抗癌藥物ThailandepsinA的研究.pdf

1、稀有的伯克氏菌E264（Burkholderia thailandensis E264）是從泰國稻田中分離得到的，能夠合成具有雙環(huán)縮肽結(jié)構(gòu)的物質(zhì)Thailandepsin A。Thailandepins A是一類組蛋白去乙?；敢种苿℉DACI），是抗癌藥物FK228的結(jié)構(gòu)類似物，對多種耐藥性腫瘤具顯著作用。目前，野生型菌株合成 Thailandepsin A產(chǎn)量很低（10mg/L），不適合進(jìn)行大規(guī)模商業(yè)化應(yīng)用，本論文試圖通過培養(yǎng)基優(yōu)

2、化和大孔樹脂原位富集的方法來提高Thailandepins A的產(chǎn)量。
　　首先，通過單因子實驗對伯克氏菌 E264的發(fā)酵條件和培養(yǎng)基成分進(jìn)行初篩,確定了碳源、氮源、無機鹽的種類,以及溫度、pH值、搖床轉(zhuǎn)速等因素的最佳條件。在溫度28℃，250ml的搖瓶，裝液量為65 ml，接種量為1％，培養(yǎng)基pH值7.0的條件下，對培養(yǎng)基配方進(jìn)行優(yōu)化。
　　其次，通過在伯克氏菌E264發(fā)酵培養(yǎng)基中添加大孔樹脂HP-20對產(chǎn)物進(jìn)行原位富集，

3、可使大部分Thailadepsin A在培養(yǎng)的同時就被樹脂吸附，從而降低了產(chǎn)物抑制，并簡化了后續(xù)提取分離步驟，產(chǎn)物的總收率比對照(不添加樹脂)提高了80%左右。大孔樹脂的添加量為4%，添加時間為發(fā)酵開始后12小時。以氯仿作為樹脂的解析液時，產(chǎn)物的回收效果較好。
　　同時，運用部分因子設(shè)計確定主要因素的效應(yīng)以及因素之間的相互作用，通過基于響應(yīng)面法的中心組合設(shè)計構(gòu)建模型,預(yù)測出最優(yōu)的培養(yǎng)基配方（g/L）：葡萄糖17.89，胰蛋白胨34

4、.98，K2HPO420.44，KH2PO44.4，檸檬酸鈉0.01。產(chǎn)量的實測值為236.7mg/L，與模型的預(yù)測值251.9mg/L相符合，證明了模型的正確性以及該優(yōu)化后的培養(yǎng)基的效用。響應(yīng)面法優(yōu)化后的產(chǎn)量236.7mg/L比單因子優(yōu)化后產(chǎn)量提高了2倍多。
　　另外，對Thailandepsin A分批發(fā)酵動力學(xué)模型進(jìn)行了研究，以Logistic和Luedeking-Piret方程為基礎(chǔ)，建立了動力學(xué)模型，較好的描述了生物量（