產(chǎn)橙皮苷酶菌株的篩選及發(fā)酵提取耦合制備橙皮素單葡萄糖苷的研究.pdf

1、橙皮素單葡萄糖苷(HMG)是由橙皮苷脫去一分子鼠李糖形成的，生理活性與橙皮苷相似，在水中的溶解度和吸收利用率比橙皮苷更高。本文篩選高產(chǎn)橙皮苷酶的發(fā)酵菌株，并對菌株的發(fā)酵條件和提高橙皮素單葡萄糖苷得率的發(fā)酵方法進(jìn)行了研究。
　　 從常年生產(chǎn)橙皮苷工廠的土樣中篩選得到1株能夠降解橙皮苷產(chǎn)生橙皮素單葡萄糖苷的菌株，經(jīng)過顯微形態(tài)觀察和18SrDNA序列分析，鑒定該菌株為肉座菌目雪腐鐮刀菌（Fusariumnivale），并保存于中科院微

2、生物研究所，保藏編號:6238。雪腐鐮刀菌6238發(fā)酵酶解橙皮苷產(chǎn)物的鑒定結(jié)果是橙皮素單葡萄糖苷和橙皮素的混合物，表明其所產(chǎn)橙皮苷酶包括a-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶兩種，可將橙皮苷水解為橙皮素單葡萄糖苷，并進(jìn)一步降解為橙皮素。
　　 以雪腐鐮刀菌6238為發(fā)酵菌株，研究了碳源、氮源、無機(jī)鹽及橙皮苷添加量、菌種接種量、發(fā)酵溫度、發(fā)酵pH值等條件對雪腐鐮刀菌6238產(chǎn)酶酶活的影響，并采用響應(yīng)面法對各發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果

3、表明:以蔗糖為碳源，添加量為30g/L;酵母膏為氮源，添加量為3g/L;KaHPO4為無機(jī)鹽，添加量為1g/L;橙皮苷添加量為3％;接種量6％(v/v)，溫度30℃，pH6，轉(zhuǎn)速158r/min，a-L-鼠李糖苷酶酶活最高可達(dá)到95.6U/ml。
　　 通過對不同極性的樹脂進(jìn)行篩選，選擇對橙皮素單葡萄糖苷具有良好的吸附和分離能力的樹脂;同時(shí)，研究不同的吸附、洗脫條件對橙皮素單葡萄糖苷純化的影響。結(jié)果表明:大孔樹脂HPD100對橙

4、皮素單葡萄糖苷具有較強(qiáng)的吸附乖解析能力;在50％的乙醇溶液、2BV/h的流速作為洗脫條件下，發(fā)酵酶解產(chǎn)物橙皮素單葡萄糖苷和橙皮素能較好分離。
　　 將發(fā)酵罐與大孔樹脂分離柱連接制備橙皮素單葡萄糖苷，研究了不同的條件對橙皮素單葡萄糖苷得率的影響。結(jié)果表明:發(fā)酵-酶解-提取耦合的方法能夠提高橙皮素單葡萄糖苷的得率，在發(fā)酵液回流速度為3BV/h的條件下，橙皮素單葡萄糖苷得率可由原來的13.3％提高至48.3％。
　　 本研究工