產(chǎn)β -葡萄糖苷酶菌株的篩選鑒定及亞麻籽餅粕脫毒工藝的研究.pdf

1、亞麻（Linum usitatissimum L）為油料作物，其種子稱(chēng)為亞麻籽。亞麻籽經(jīng)過(guò)壓榨取油后的副產(chǎn)物為亞麻籽餅粕，亞麻籽餅粕因其中富含蛋白類(lèi)物質(zhì)，不飽和脂肪酸，纖維素和其他有益成分等被廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)生產(chǎn)，農(nóng)業(yè)和食品添加劑領(lǐng)域?？梢?jiàn)亞麻籽系列的深加工極具開(kāi)發(fā)前景。雖然亞麻籽餅粕中含有不同類(lèi)的有益因子，但其中還含有其他的抗?fàn)I養(yǎng)因子，比如VB6拮抗物，亞麻籽膠，亞麻亭，粗纖維，胰蛋白酶抑制因子，植酸，生氰糖苷等。尤其生氰糖苷，它會(huì)在

2、動(dòng)物體內(nèi)相關(guān)水解酶的作用下代謝成氫氰酸，引起動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)中毒，從而極大限制了亞麻籽餅粕的應(yīng)用范圍，只能限量添加到HCN耐受的反芻動(dòng)物飼料中。因此，要使亞麻籽餅粕的應(yīng)用領(lǐng)域進(jìn)一步擴(kuò)大和加深，生氰糖苷的脫除就成為了亟待解決的問(wèn)題。
　　研究表明，β-葡萄糖苷酶具有降解生氰糖苷的作用，能夠把生氰糖苷轉(zhuǎn)化為氰根離子。已有研究報(bào)道利用天然存在的，能夠產(chǎn)生β-D-葡萄糖苷酶的細(xì)菌來(lái)降解木薯中的生氰糖苷，也有報(bào)道把人β-葡萄糖苷酶基因（Glu）利

3、用基因工程技術(shù)導(dǎo)入到酵母菌中構(gòu)建獲得工程菌，用該工程菌對(duì)亞麻籽進(jìn)行處理后發(fā)現(xiàn)氰苷類(lèi)物質(zhì)降解顯著。另外，對(duì)比物理和化學(xué)方法，用生物學(xué)方法處理植物中的生氰糖苷具有條件溫和，能耗低，操作簡(jiǎn)便，無(wú)試劑殘留的優(yōu)點(diǎn)，預(yù)計(jì)具有很廣闊的開(kāi)發(fā)前景。
　　未做處理的亞麻籽餅粕可以作為飼料添加劑少量添加到反芻動(dòng)物（牛）日常飲食中，且反芻動(dòng)物未表現(xiàn)出不良反應(yīng)。推測(cè)，長(zhǎng)期食用亞麻籽餅粕的牛的腸道，經(jīng)過(guò)馴化作用，其中很有可能存在降解生氰糖苷的菌株。另外，β-

4、葡萄糖苷酶可以降解七葉苷為七葉素，七葉素能與Fe3+發(fā)生顯色反應(yīng)而呈現(xiàn)黑色。本項(xiàng)研究以長(zhǎng)期食用未做處理亞麻籽餅粕的牛的糞便為菌群來(lái)源，以含有七葉苷和三價(jià)鐵離子的培養(yǎng)基作為目的菌株的選擇培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)初篩和復(fù)篩過(guò)程，從中分離出了五株高產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的菌株。分子生物學(xué)結(jié)合形態(tài)學(xué)，生理生化表征鑒定得出這五株菌分別為Geotrichum candidum，Lichtheimia ramose，Citrobacter freundii，

5、Providencia rettgeri，Proteus vulgaris。采用p-NPG法對(duì)五株目的菌株產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的酶活力進(jìn)行了定量測(cè)定，結(jié)果顯示五株菌中Geotrichum candidum（M-1）的產(chǎn)酶活力是最高的，可以達(dá)到3.55U.ml-1。整體來(lái)看，真菌的產(chǎn)酶活力要顯著高于細(xì)菌的產(chǎn)酶活力。通過(guò)對(duì)比發(fā)酵脫毒結(jié)果，發(fā)現(xiàn)菌株Lichtheimia ramose（M-2）脫毒率最高。以M-2作為初始發(fā)酵菌株，以脫毒率和粗蛋白