中國對蝦貯藏保鮮過程中肌肉蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、中國對蝦是我國最主要的對蝦品種之一，具有豐富的營養(yǎng)價值、消費量大，在我國廣泛養(yǎng)殖;但目前也面臨眾多水產(chǎn)品共同面臨的問題——易腐敗變質(zhì)。因此，人們開發(fā)出了各種針對水產(chǎn)品品質(zhì)進行評價的方法，如感官評價、物理評價、化學(xué)評價、微生物評價等，而從水產(chǎn)品中蛋白質(zhì)的角度進行相關(guān)研究的報道較少。
　　 近幾年來，蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展迅速，其中以雙向電泳技術(shù)(2-DE)、質(zhì)譜鑒定技術(shù)(MS)及其生物信息技術(shù)(Bioinformatics)為基礎(chǔ)的蛋白質(zhì)

2、組學(xué)技術(shù)為蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展奠定了堅實基礎(chǔ)，也為水產(chǎn)品品質(zhì)評價及形成機理的研究提供了新的思路。借助差異蛋白質(zhì)組學(xué)尋找、篩選并鑒定與中國對蝦新鮮度品質(zhì)相關(guān)的蛋白，再通過蛋白數(shù)據(jù)庫及與該蛋白相關(guān)的文獻報道進行深入分析，探究中國對蝦品質(zhì)變化的生理生化基礎(chǔ)，能夠為基于蛋白質(zhì)的中國對蝦品質(zhì)評價提供相關(guān)依據(jù)。
　　 本研究通過對影響中國對蝦肌肉蛋白雙向電泳的相關(guān)技術(shù)參數(shù)進行比較和優(yōu)化，建立了中國對蝦肌肉蛋白的雙向電泳技術(shù)體系;并以從貯藏過程中

3、中國對蝦樣品中提取的低鹽溶性蛋白和從保鮮過程中（殼聚糖涂膜保鮮）中國對蝦樣品中提取的全肌肉蛋白為研究對象，對中國對蝦肌肉蛋白變化進行了差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究，主要的研究結(jié)果如下:
　　 1、中國對蝦肌肉蛋白雙向電泳體系:在第一向(IEF)中，裂解液配方為8M尿素、2M硫脲、4％CHAPS、65mMDTT、0.67％Bio-Lyte，IPG膠條選擇pH4～7、長度17cm，蛋白上樣體積為300μL、上樣量120μg，搭鹽橋，等電聚焦時

4、間80000v*h，主動水化方式上樣;平衡時間13.5min;在第二向(SDS-PAGE)中，采用12.5％濃度膠進行電泳;使用硝酸銀染色，并適當(dāng)控制顯色時間;最后對膠進行掃描獲取凝膠圖譜，并用PDQuest軟件進行分析。該體系能有效提高中國對蝦肌肉蛋白質(zhì)的2-DE圖譜分辨率。
　　 2、通過SDS-PAGE技術(shù)研究中國對蝦不同溶解性肌肉蛋白質(zhì)的變化規(guī)律，發(fā)現(xiàn)中國對蝦的低鹽溶性蛋白貯藏過程中部分蛋白發(fā)生了較為明顯的變化，故應(yīng)用雙

5、向電泳技術(shù)對不同貯藏時間的中國對蝦低鹽溶性蛋白的2-DE圖譜進行比較研究，從中篩選出8個差異較為顯著的蛋白點進行質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)鑒定，鑒定出蛋白:NKG2D。該蛋白是與生物體免疫功能相關(guān)的受體，且該蛋白點是貯藏過程中蛋白豐度由多變少的顯著差異蛋白點。推測NKG2D受體蛋白是反映中國對蝦新鮮度品質(zhì)變化的相關(guān)蛋白之一。
　　 3、研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖涂膜保鮮對中國對蝦具有顯著保鮮效果，為研究殼聚糖保鮮對中國對蝦肌肉蛋白質(zhì)的

6、影響，應(yīng)用雙向電泳技術(shù)對殼聚糖涂膜保鮮與對照組貯藏過程中中國對蝦肌肉全蛋白質(zhì)進行了分析。從三類對比中尋找差異蛋白點:同一冷藏時間保鮮組和對照組的樣品2-DE圖譜對比、保鮮組樣品不同冷藏時間的2-DE圖譜對比、對照組樣品不同冷藏時間的2-DE圖譜對比，從中篩選了8個具有統(tǒng)計意義(P＜0.05)的差異蛋白點進行質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)測定，鑒定出蛋白:ATP-PRT（ATP phosphoribosyltransferase，ATP