紅曲菌PHDS26代謝產(chǎn)物Monascopyridine A和Monascopyridine B的分離、純化和測(cè)定.pdf

1、本論文主要以橙色紅曲菌pksCT基因缺失株P(guān)HDS26發(fā)酵菌絲為研究對(duì)象，對(duì)其代謝產(chǎn)物monascopyridine A（MPA）和monascopyridine B（MPB）進(jìn)行分離和純化，并建立了同時(shí)檢測(cè)MPA和MPB的HPLC方法，具體內(nèi)容如下：
　　1：采用硅膠柱層析和半制備HPLC從菌絲體中分離、純化了紅曲菌PHDS26的兩種代謝產(chǎn)物MPA和MPB。硅膠柱層析條件為：以200-300目的硅膠為固定相，以甲醇為提取劑，以7

2、:3（v/v）的正己烷-乙酸乙酯為洗脫液，常壓下過柱；半制備HPLC條件：色譜柱Zorbax SB-C18（9.4×150 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-水（75:25，v/v），流速為2.5 mL/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)300 nm，柱溫為室溫。在此條件下可得到純度為95％的MPA和MPB。
　　2：采用超聲波輔助法提取MPA和MPB，先用單因素試驗(yàn)對(duì)影響兩者提取含量的各因素進(jìn)行研究，再設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)對(duì)提取的各個(gè)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，并進(jìn)行

3、驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，最后得出最佳的提取條件，即提取劑90%甲醇，提取溫度40℃，提取時(shí)間10 min，料液比1:25，提取次數(shù)為2次。
　　3：首次建立同時(shí)檢測(cè)MPA和MPB的HPLC方法，色譜條件為：色譜柱Hypersil ODS-2（5μm，250×4.6 mm），流動(dòng)相為乙腈-水（60:40，v/v），流速為0.8 mL/min，柱溫為25℃，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)300 nm，進(jìn)樣量：20μL；其中MPA的線性方程Y=33.386X+17.0

4、21，相關(guān)系數(shù)R=0.9999，線性范圍0.5-200μg/mL，平均回收率99.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.0%（日內(nèi)）、4.8%（日間）；MPB的線性方程為Y=54.691X+0.409，相關(guān)系數(shù)R=0.9997，線性范圍為0.5-300μg/mL，平均回收率94%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.1%（日內(nèi)）、4.6%（日間）。采用建立的HPLC方法檢測(cè)了紅曲菌AS3.4384及其pksCT基因缺失株P(guān)HDS26不同發(fā)酵時(shí)間的菌絲體和發(fā)酵液中MPA和