紅曲菌氨肽酶的研究.pdf

1、紅曲菌能產(chǎn)生多種生物活性酶：淀粉酶、糖化酶、麥芽糖酶、蛋白酶、果膠酶、脂肪酶、酯化酶、羧肽酶、氨肽酶等。氨肽酶是一種蛋白酶，在蛋白水解液脫苦和蛋白質(zhì)的深度水解中有重要作用。相對于動物和植物中提取氨肽酶，微生物發(fā)酵生產(chǎn)氨肽酶具有成本低廉、產(chǎn)量大、酶活高的優(yōu)點。
　　 本論文主要對紅曲菌固體發(fā)酵和液體發(fā)酵生產(chǎn)氨肽酶進行研究，篩選出生產(chǎn)氨肽酶的最優(yōu)條件。利用雙水相萃取和超濾的方法初步提純氨肽酶，初步探索可放大提取氨肽酶的工藝。另外，對

2、初步提純的氨肽酶進行酶學(xué)性質(zhì)的研究。
　　 對紅曲菌固體發(fā)酵和液體發(fā)酵生產(chǎn)氨肽酶的產(chǎn)酶條件進行優(yōu)化，最終結(jié)果表明：固體發(fā)酵生產(chǎn)氨肽酶的時間較長，培養(yǎng)13 d，酶活達到最大，酶活達到115.3U/mL。液體發(fā)酵生產(chǎn)氨肽酶時間比較短，培養(yǎng)7 d酶活達到最大，酶活相對較高，達到376.9 U/mL。
　　 對紅曲菌發(fā)酵產(chǎn)物的氨肽酶粗酶液進行初步提純工藝的研究，結(jié)果表明：固體發(fā)酵的粗酶液經(jīng)優(yōu)化出的雙水相萃取體系萃取，并做該體系的

3、直線放大實驗，蛋白的分配系數(shù)Kp、酶純化系數(shù)K、及酶的回收率均幾乎不發(fā)生變化，說明該體系可以直線擴大用于大量氨肽酶粗酶液萃取。
　　 按照雙水相體系的條件：pH為7.5、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18％的(NH4)2SO4、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18％的PEG-2000，放大雙水相體系500倍，分別對1000 mL固體發(fā)酵產(chǎn)物提取的粗酶液A和液體發(fā)酵產(chǎn)物提取的粗酶液B，進行萃取，然后經(jīng)超濾，在最適壓力為0.1 Mpa，30kDa聚醚砜中空纖維膜進行濃縮2倍

4、時得到初步純化，結(jié)果表明：粗酶液A經(jīng)提純后，氨肽酶酶液A的比活達到153589.46(U/mg)，純化倍數(shù)達到6.3，粗酶液B經(jīng)提純后的氨肽酶酶液B比活達到261481.61(U/mg)，純化倍數(shù)達到9.34。
　　 對紅曲菌固體發(fā)酵物純化的氨肽酶酶液A和紅曲菌液體發(fā)酵物純化的氨肽酶酶液B，進行酶學(xué)性質(zhì)的初步研究，結(jié)果表明：氨肽酶酶液A的半衰期為20 d左右，氨肽酶酶液B的半衰期為24 d左右，酶活大體下降趨勢還是相近；兩種氨肽