h-FABP與h-FABP-cTnI試紙條的制備和性能指標(biāo)的檢測.pdf

1、心型脂肪酸結(jié)合蛋白(H-FABP)是低分子量的新型小細(xì)胞質(zhì)的蛋白質(zhì)，在正常情況下，血漿中濃度很低，在急性心肌梗死(AMI)發(fā)生1.5h后，血漿中H-FABP濃度急劇上升，因此可用于AMI早期診斷的標(biāo)志物;同樣心肌鈣蛋白Ⅰ(cTnⅠ)在健康人血液內(nèi)不含或含有很少量，但在心肌受損后，特別是AMI發(fā)生后，cTnⅠ能迅速地釋放入血，3～6h出現(xiàn)異常增高，因此可用于AMI中期診斷的標(biāo)志物。本課題主要是研究膠體金試紙條在即時檢驗(Point-of-

2、Care Test，POCT)中的應(yīng)用，將H-FABP單克隆抗體或者將H-FABP/cTnⅠ單克隆抗體包被在一個試紙條上制備膠體金免疫層析試紙條，該試紙條由膠體金作為標(biāo)記物，運用雙抗夾心法原理，NC膜上的T線顏色會隨著待測樣品中的抗原濃度升高而變深來對AMI進行定性實驗，借助膠體金定量儀可以對H-FABP和cTnⅠ進行定量檢測。本課題探討了膠體金優(yōu)化的制備工藝，H-FABP膠體金試紙條的制備和性能指標(biāo)的檢測以及H-FABP/cTnⅠ二聯(lián)

3、試紙條的制備和性能指標(biāo)的檢測。
　　第一部分 綜述
　　綜述分為3個部分:第一部分主要是介紹POCT的發(fā)展?fàn)顩r和應(yīng)用技術(shù);第二部分是介紹膠體金的發(fā)展、原理和制備方法，以及膠體金免疫層析技術(shù)的原理、分類、優(yōu)點和應(yīng)用;第三部分是H-FABP和cTnⅠ的簡介和意義的介紹。
　　第二部分 H-FABP膠體金免疫層析試劑條處方工藝的研究
　　本部分探索了膠體金制備的優(yōu)化工藝，對膠體金與蛋白結(jié)合的單因素進行了考察以及分析樣品

4、墊和結(jié)合墊預(yù)處理液及金標(biāo)恢復(fù)液，篩選合適的制備試紙條的材料，制備出性能優(yōu)良的膠體金試紙條。
　　第三部分 H-FABP膠體金試紙條性能指標(biāo)的檢測
　　主要對心型脂肪酸結(jié)合蛋白(H-FABP)膠體金免疫層析試紙條的性能指標(biāo)進行了檢測，結(jié)果表明層析速度為16.68mm/min，最低檢測限是小于0.01μg/mL，H-FABP的濃度在0.01-1μg/mL具有良好的線性關(guān)系，準(zhǔn)確度的相對偏差為-0.399％，精密度均小于15％，試

5、紙條應(yīng)在20℃～30℃檢測，儲存溫度為20℃左右，待測樣品用量為70μl，抗凝劑和不同樣本對檢測結(jié)果無干擾，臨床小樣本結(jié)果表明陽性和陰性的符合率達(dá)100％，H-FABP膠體金試紙條檢測結(jié)果與省內(nèi)三甲醫(yī)院的臨床檢測結(jié)果一致。
　　第四部分 H-FABP/cTnⅠ二聯(lián)試劑條的制備和性能指標(biāo)檢測
　　本部分是H-FABP/cTnⅠ二聯(lián)膠體金試紙條的制備和性能指標(biāo)檢測，先分別將H-FABP和cTnⅠ的單克隆抗體1與膠體金結(jié)合，再噴涂

6、在經(jīng)預(yù)處理的結(jié)合墊上，37℃烘干待用;cTnⅠ和H-FABP的單克隆抗體2分別包被在T1線和T2線，37℃烘干待用，最后按第二章一樣組裝試紙條，實驗結(jié)果表明這兩種蛋白之間沒有交叉反應(yīng)。同樣對該二聯(lián)試紙條的性能進行了檢測，實驗結(jié)果表明層析速度為16.431 mm/min，H-FABP和cTnⅠ的最低檢測限分別小于10ng/mL和0.3ng/mL，H-FABP的濃度在10-1000ng/mL和cTnⅠ的濃度在3.3-54ng/mL具有良好的