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文檔簡介
1、粘質(zhì)沙雷氏菌是一種廣泛存在于自然界中的革蘭氏陰性菌,該菌是包括人類在內(nèi)的哺乳動(dòng)物、腔腸動(dòng)物、昆蟲、線蟲、植物等的條件致病菌。該菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物靈菌紅素具備多種生物活性,其中最引人注意的是靈菌紅素引起癌細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制完全不同于當(dāng)前的臨床抗癌藥物,是很有開發(fā)潛力的抗癌藥物。現(xiàn)階段對(duì)細(xì)胞周期的研究主要停留在真核細(xì)胞上,本文創(chuàng)新性地將流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用到原核細(xì)胞中研究粘質(zhì)沙雷氏菌的生長代謝規(guī)律,可為臨床解決該菌引起的感染和靈菌紅素產(chǎn)量提高提供理
2、論指導(dǎo),也為原核生物細(xì)胞周期規(guī)律的研究提供重要參考價(jià)值。
本論文主要研究了碳源對(duì)粘質(zhì)沙雷氏菌次級(jí)代謝調(diào)控的影響,首先在以蔗糖為碳源的培養(yǎng)基中添加環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP),研究cAMP在碳源代謝過程中的作用,然后用牛肉膏、蔗糖、甘油、葡萄糖分別發(fā)酵生產(chǎn)靈菌紅素,比較不同碳源對(duì)靈菌紅素合成的影響。論文研究工作如下:(1)細(xì)胞內(nèi)cAMP的濃度升高時(shí),碳源利用效率變高,細(xì)胞分
3、裂及DNA復(fù)制速度隨之加快,細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,靈菌紅素的生物合成過程被阻斷,表明cAMP影響細(xì)菌碳源代謝過程。(2)用不同碳源發(fā)酵生產(chǎn)靈菌紅素,菌體干重比較:牛肉膏>蔗糖>甘油>葡萄糖,靈菌紅素濃度比較:蔗糖>葡萄糖>甘油>牛肉膏。結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析得:碳源種類不同時(shí),碳源代謝途徑隨之改變,導(dǎo)致細(xì)菌分裂與遺傳物質(zhì)復(fù)制速率、細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、靈菌紅素生產(chǎn)能力的改變。實(shí)驗(yàn)表明碳源對(duì)粘質(zhì)沙雷氏菌次級(jí)代謝有重要的調(diào)控作用,在四種碳源,牛肉膏
4、、蔗糖、甘油、葡萄糖中,蔗糖是最佳碳源。(3)細(xì)菌在正常代謝下,細(xì)胞分裂生長,遺傳物質(zhì)復(fù)制分配過程,次級(jí)代謝狀態(tài)與碳源代謝是一個(gè)協(xié)調(diào)的過程。
本文還對(duì)粘質(zhì)沙雷氏菌在5L發(fā)酵罐中的碳源、磷酸鹽、培養(yǎng)基配方、溶氧、補(bǔ)料過程進(jìn)行了初步探討。結(jié)果為:發(fā)酵中保持溶氧30%以上,限制加入磷酸鹽,初始培養(yǎng)基配方:蔗糖0.25%,蛋白胨1.5%,氯化鈉0.5%,無水氯化鎂0.25%,吐溫-800.5%;發(fā)酵至50 h時(shí)進(jìn)行補(bǔ)料,補(bǔ)料配方:蔗糖
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