黑木耳中性多糖片段硫酸酯對輻射誘導(dǎo)氧化應(yīng)激防護(hù)作用.pdf

1、隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,由于空間技術(shù)和核技術(shù)的應(yīng)用,輻射傷害不僅見于戰(zhàn)時,已滲透到各個領(lǐng)域,輻射產(chǎn)生大量自由基能引發(fā)機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng),現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為炎癥、腫瘤、衰老、血液病、以及心、肝、肺、皮膚等近百余種相關(guān)疾病的發(fā)生機(jī)理與體內(nèi)自由基產(chǎn)生過多而得不到及時有效清除有著密切的關(guān)系,由于合成抗氧化劑存在穩(wěn)定性差、作用時間短、毒副作用、不適合長期服用等問題,發(fā)掘新型天然抗氧化劑已成為食品科學(xué)和航天醫(yī)學(xué)的研究重點。本課題采用化學(xué)修飾方法制備黑木耳中性多

2、糖片段硫酸酯(Sulfate of neutral Auricularia auricular polysaccharides,SNAAP),采用清除體外自由基進(jìn)行活性跟蹤,經(jīng)細(xì)胞模型確證,SNAAP對氧化應(yīng)激具有很好的防護(hù)作用,進(jìn)一步建立氧化應(yīng)激動物模型,從細(xì)胞、分子水平系統(tǒng)研究SNAAP輻射防護(hù)作用,旨在促進(jìn)黑木耳及其多糖資源的深度開發(fā)利用。
　　選用氯磺酸-N,N二甲基甲酰胺(CSA-DMF)作為酯化試劑,采用單因素實驗,以

3、硫酸酯化試劑(CSA:DMF)體積比為1:6;酯化溫度為50℃,反應(yīng)時間為3h,進(jìn)行非選擇性修飾制備木耳中性多糖片段硫酸酯:得率為51.89±1.36％,離子色譜法測定其硫酸根含量為31.00±2.79%,計算硫酸基取代度為0.78±0.11;經(jīng)氣相色譜法分析該工藝下制備SNAAP產(chǎn)物中甲酰胺和N,N-二甲基甲酰胺溶劑殘留量分別為80.1±7.5μg/L和64.1±4.8μg/L,均符合人用藥品注冊技術(shù)規(guī)范國際協(xié)調(diào)會(ICH)和中國藥典

4、(2000版)限量標(biāo)準(zhǔn)。
　　采用活性跟蹤法,研究了SNAAP的體外抗氧化活性,當(dāng)受試樣品濃度為2.0mg/mL時,SNAAP對超氧自由基清除率為95.71%,而黑木耳中性多糖片段清除率僅為3.75%,表明硫酸酯化能顯著提高黑木耳中性多糖片段對超氧自由基的清除能力,篩選得到SNAAP對超氧自由基清除活性最強(qiáng)。紅外光譜解析SNAAP在1249cm-1(νS=O)和820cm-1(νC-O-S)處有-OSO3的S=O伸縮振動和C-O-

5、SO3基團(tuán)的伸縮振動特征吸收峰,說明合成產(chǎn)物SNAAP有硫酯鍵。且硫酸基位于SNAAP中單糖殘基平伏位置,并在C6位上發(fā)生取代;紫外光譜顯示SNAAP未出現(xiàn)新的特征吸收峰,證明該酯化方法是較為溫和的硫酸化修飾手段。原子力顯微鏡表征SNAAP分子中具有三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),相對分子量為6.53×106Da,且與黑木耳中性多糖片段相比,經(jīng)過硫酸化,SNAAP的分子量分布變窄,分子量較為均一和集中。SNAAP單糖組成分別由D-核糖、D-甘露糖、L

6、-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-葡萄糖、D-半乳糖組成,各單糖之間摩爾比例為1.0:7.0:1.0:1.0:4.0:10:2.0。
　　MTT法評價了SNAAP不具有細(xì)胞毒性作用,以X射線輻射誘導(dǎo)人外周血為氧化應(yīng)激模型,采用血常規(guī)分析,篩選得到SNAAP對氧化應(yīng)激防護(hù)作用最佳,進(jìn)一步驗證實驗研究發(fā)現(xiàn)SNAAP中劑量組(60μg/mL)可以將輻射受損的白細(xì)胞數(shù)維持至對照組水平,減少輻射引起的畸變白細(xì)胞數(shù),具有輻射防護(hù)功效。

7、r>　　構(gòu)建γ輻射誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激動物模型,研究發(fā)現(xiàn)SNAAP各劑量組能夠直接清除輻射產(chǎn)生的自由基,可有效的促進(jìn)造血系統(tǒng)恢復(fù)和免疫細(xì)胞增殖和生長,提高機(jī)體的免疫系統(tǒng)功能;能夠顯著提高小鼠各臟器中超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和乳酸脫氫酶(LDH)活性,增加還原型谷胱甘肽(GSH)的含量,降低髓過氧化物酶(MPO)活性,降低丙二醛(MDA)水平,證實SNAAP能夠有效激活抗氧化酶系,抑制氧