紅花、桃仁、懷牛膝水提物抑制轉(zhuǎn)基因斑馬魚模型新生血管生成的效應(yīng)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)選用臨床上被廣泛用于惡性腫瘤治療的紅花、桃仁、懷牛膝等具有活血化瘀功效的中藥，基于TG品系fli1a-EGFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚生物模型來篩選其中具有抑制腫瘤新生血管生成效用的中藥，客觀、系統(tǒng)地評(píng)價(jià)紅花、桃仁、懷牛膝等具有活血化瘀功效的中藥在臨床上應(yīng)用于治療惡性腫瘤的可靠性和安全性，為臨床使用活血化瘀中藥治療惡性腫瘤提供客觀的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：選用TG品系的fli1a-EGFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚為生物模型，每個(gè)樣品處理30只斑

2、馬魚胚胎，在12孔板（Falcon）中實(shí)驗(yàn)。將工作濃度為200μg/ml的紅花、桃仁、懷牛膝水提取物和陽性對(duì)照藥物-PTK787（5μg/ml），分別處理受精后22小時(shí)（22hpf）的斑馬魚胚胎直至48hpf。完整的連接背主動(dòng)脈（DA）和背長軸血管（DLAV）之間的一段血管，即體節(jié)間血管（ISV），是衡量斑馬魚血管新生（angiogenesis）的重要指標(biāo)。藥物處理實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，在體視顯微鏡(明場)和體視熒光顯微鏡下進(jìn)行血管表型觀察和拍照

3、，拍照時(shí)相為48hpf，以分析各個(gè)樣品對(duì)斑馬魚體節(jié)間血管（ISV）生成的影響。同時(shí)，觀察和統(tǒng)計(jì)各個(gè)樣品誘導(dǎo)的斑馬魚發(fā)育毒性和死亡數(shù)。
　　結(jié)果：各個(gè)樣品均未出現(xiàn)藥物誘導(dǎo)的斑馬魚發(fā)育毒性和死亡數(shù)事件。體視顯微鏡(明場)和體視熒光顯微鏡下完整的ISVs表型觀察顯示：空白對(duì)照組斑馬魚胚胎的ISVs的表達(dá)完整、清晰；與空白對(duì)照組相比較，陽性對(duì)照組采用瓦他拉尼干預(yù)的斑馬魚胚胎的ISV及DLAV的熒光表達(dá)缺失；紅花、桃仁、懷牛膝水提物組斑馬魚

4、胚胎的ISVs的熒光表達(dá)都有不同程度的變細(xì)、熒光強(qiáng)度減弱，或分布紊亂；其中，懷牛膝、紅花水提物組斑馬魚胚胎ISVs的熒光表達(dá)變細(xì)、強(qiáng)度減弱較為明顯，且分布紊亂，懷牛膝水提物組尤為突出。
　　結(jié)論：瓦他拉尼能完全抑制斑馬魚胚胎的ISVs及DLAV；臨床治療腫瘤常用活血化瘀中藥紅花、桃仁、懷牛膝對(duì)斑馬魚胚胎的ISVs有不同程度的抑制作用；活血化瘀中藥紅花、桃仁、懷牛膝對(duì)轉(zhuǎn)基因斑馬魚新生血管生成存在抑制效用，從而抑制腫瘤生長及轉(zhuǎn)移；活血