兩種新型β-受體激動劑溴布特羅和西布特羅酶免疫分析法的建立.pdf

1、β-受體激動劑也就是人們常說的瘦肉精，這類物質(zhì)具有營養(yǎng)再分配的作用，能有效提高動物體的瘦肉率，常被用于畜牧業(yè)生產(chǎn)，并通過食物鏈危害人們的身體健康。在畜產(chǎn)品中殘留而引發(fā)的食物中毒事件見諸報端，中華人民共和國農(nóng)業(yè)部已多次頒布公告，明確提出禁止在動物飼料及其飲用水中添加β-激動劑。目前，最常使用的β-激動劑主要有鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇，近幾年也出現(xiàn)了一種新的β-激動劑苯乙醇胺A，這幾種瘦肉精都已具備了相應(yīng)的檢測方法。然而，作為新型

2、瘦肉精的溴布特羅和西布特羅，其結(jié)構(gòu)與克倫特羅相似，但測定方法有限。為對今后可能存在的瘦肉精類食品安全問題加以防范，建立溴布特羅和西布特羅的快速測定方法很有必要。
　　本研究考慮到溴布特羅和西布特羅的結(jié)構(gòu)十分相近，苯環(huán)上都帶有氨基，因而均采用重氮化法合成溴布特羅與西布特羅的包被抗原及免疫原，最終得到溴布特羅和西布特羅兩種多克隆抗體，分別建立了靈敏度高、特異性強的酶聯(lián)免疫吸附分析（ic-ELISAs）法，同時通過高效液相色譜(HPLC

3、)法印證了該法測定實際樣品的可行性。在最優(yōu)實驗條件下，基于溴布特羅抗體的ELISAs法的IC50值在0.165-0.243 ng·mL-1之間，基于西布特羅抗體的ELISAs法的IC50值為0.218 ng·mL-1，表明本研究所建立的酶聯(lián)免疫吸附分析法靈敏度高。同時該方法的交叉反應(yīng)實驗表明了其較高的特異性。本研究選擇豬肉、豬肝和豬飼料這三種實際樣品進行加標(biāo)回收測定，考察方法的準(zhǔn)確性和精密度，其中，測定溴布特羅的回收率為91.9–115

4、.4％，批內(nèi)變異系數(shù)（CV）為1.5–9.5%(n=3)，批間CV為1.7–13.4%(n=3)；測定西布特羅的回收率在95.41–114.5%，批內(nèi)CV為2.2–9.3%(n=3)，批間CV為2.3–12.3%(n=3)。與HPLC的測定結(jié)果相比，基于溴布特羅和西布特羅的兩種ELISA方法均與HPLC有著很好的相關(guān)性。此外，針對西布特羅酶免疫分析方法，本研究還選取了基于金納米顆粒的免疫層析試劑條作為方法對照，半定量試劑條的最低檢測限在