綠茶多酚EGCG自氧化對其抑癌和細(xì)胞毒效應(yīng)的影響及機(jī)制研究.pdf

1、分類號：S571.1單位代碼：10364密級：學(xué)號：12720272安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文綠茶多酚EGCG自氧化對其抑癌和細(xì)胞毒效應(yīng)的影響及機(jī)制研究CancerProliferationInhibitonCytotoxicityEffectsofEGCGAutooxidationProducts（EAOPs）theMechanismsInvolved研究生：衛(wèi)亞慶指導(dǎo)教師：張勁松教授合作指導(dǎo)教師：申請學(xué)位門類級別：農(nóng)學(xué)碩士

2、專業(yè)名稱：茶學(xué)研究方向：茶與健康所在學(xué)院：茶與食品科技學(xué)院答辯委員會主席：2015年6月I摘要EGCG主要來源于茶樹葉片，是茶葉中含量最豐富的活性物質(zhì)。綠茶多酚EGCG具有體外抑制癌細(xì)胞增殖并殺傷癌細(xì)胞的作用，能夠劑量依賴和時(shí)間依賴地抑制口腔癌細(xì)胞Tca8113和結(jié)腸癌細(xì)胞CT26的增殖，并對兩種癌細(xì)胞系產(chǎn)生細(xì)胞毒作用。其中，30μgmL的EGCG作用2天時(shí)間可抑制Tca811390%的增殖，20μgmL的EGCG作用3天時(shí)間可抑制CT

3、2670%以上的增殖；而50μgmL的EGCG作用2天時(shí)間可殺傷80%的Tca8113細(xì)胞，100μgmL的EGCG作用2天時(shí)間可殺傷60%以上的CT26細(xì)胞。EGCG抑制癌細(xì)胞增殖的作用和對癌細(xì)胞的殺傷作用都與氧化還原相關(guān)機(jī)制有關(guān)。EGCG自氧化能夠產(chǎn)生大量活性氧（Reactiveoxygenspecies，ROS），造成細(xì)胞氧化逆境。EGCG產(chǎn)生的ROS中至少包括超氧陰離子（Superoxideanion，?O2）和過氧化氫（Hyd

4、rogenperoxide，H2O2）兩種含氧自由基，當(dāng)EGCG自氧化體系中加入超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase，SOD）或過氧化氫酶（Catalase，CAT）后，探針可捕捉到的ROS量隨之減少。EGCG還具有抑制重要抗氧化酶硫氧還蛋白還原酶（Thiedoxinreductase，TrxR）的活力，以及清除基礎(chǔ)抗氧化物質(zhì)谷胱甘肽（Glutathion，GSH）和半胱氨酸（Cysteine，Cys）的能力。茶葉中存

5、在多酚氧化酶和過氧化物酶，可以在細(xì)胞破碎的條件下將EGCG氧化為聚合物，如茶黃素、茶紅素等。EGCG在體外的氧化可以通過酶催化或其他條件的設(shè)定而實(shí)現(xiàn)。37℃水浴條件下，將5mgmLEGCG溶于pH8.0，200mM的PBS中，以1ml管的體積分裝至12100mm的玻璃管中，分別進(jìn)行2h、4h、8h、16h、32h的自氧化，獲得一系列EGCG的自氧化產(chǎn)物（EGCGautooxidationproducts，EAOPs）。隨著自氧化的進(jìn)行，

6、溶液顏色肉眼可見地由無色透明逐漸變黃、變紅、變深；可見紫外光譜掃描表明，氧化物在510nm處的吸收逐漸增加，并在250350nm（EGCG最大吸收波長280nm附近）范圍內(nèi)呈現(xiàn)規(guī)律性的變化。HPLC分析表明，在這種條件下EGCG的氧化速度極快：EAOP2h溶液中只剩余初始EGCG含量的20%，而在EGCG的保留時(shí)間附近，出現(xiàn)了一些新的物質(zhì)峰，但其中并未檢測到茶黃素成分。由于EAOP2h的樣品溶液顏色已經(jīng)為淺棕色，且其后所有的樣品中也未檢