苗藥HL-1112對(duì)幽門(mén)螺桿菌的抗菌活性及藥物作用前后蛋白質(zhì)組學(xué)影響的研究.pdf

1、目的：檢測(cè)苗藥 HL-1112對(duì)幽門(mén)螺桿菌的體外抗菌活性，觀察苗藥HL-1112作用幽門(mén)螺桿菌前后的蛋白質(zhì)及基因表達(dá)水平的變化，初步探討苗藥HL--1112對(duì)幽門(mén)螺桿菌的抑菌機(jī)制，為深入研究苗藥 HL-1112的作用機(jī)制和開(kāi)發(fā)利用苗藥 HL-1112提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：采用瓊脂稀釋法檢測(cè)苗藥HL-1112對(duì)幽門(mén)螺桿菌國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序株ATCC700392的最低抑菌濃度（Minimal inhibitory concentrati

2、on，MIC）；選用三氯醋酸/丙酮沉淀法收集藥物作用前后的幽門(mén)螺桿菌全菌蛋白，應(yīng)用雙向凝膠電泳技術(shù)(2-DE)對(duì)其進(jìn)行分離，PDquest軟件尋找藥物作用前后表達(dá)差異明顯的蛋白質(zhì)點(diǎn)，ABI-4800質(zhì)譜儀對(duì)差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，生物信息學(xué)分析差異蛋白的性質(zhì)與功能；采用 Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)2-DE中的差異蛋白-過(guò)氧化氫酶在藥物作用前后的基因表達(dá)水平。
　　結(jié)果：苗藥 HL-1112對(duì)幽門(mén)螺桿菌國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序株 ATC

3、C700392的MIC為4mg/mL，且其對(duì)細(xì)菌的抑制作用與藥物濃度成正比；通過(guò)質(zhì)譜技術(shù)鑒定出14個(gè)差異蛋白點(diǎn)，其中延胡索酸還原酶黃素蛋白亞基、烷基過(guò)氧化氫還原酶、假想蛋白0130、粘附-巰基還原酶、非血紅素鐵蛋白僅在藥物作用前的全菌蛋白中表達(dá)，乙酰脲利用蛋白A、亮氨酰胺肽酶、過(guò)氧化氫酶、cag致病島、延胡索酸還原酶鐵硫亞基和假想蛋白0721在苗藥 HL-1112作用后明顯下調(diào)，而丙酰胺左旋門(mén)冬氨酸酶、延長(zhǎng)因子 P和NADPH黃素還原酶

4、的蛋白表達(dá)則在藥物作用后上調(diào)；Real-time PCR結(jié)果顯示幽門(mén)螺桿菌過(guò)氧化氫酶在藥物作用后的基因表達(dá)水平高于藥物作用前的表達(dá)水平。
　　結(jié)論：
　　1.苗藥 HL-1112對(duì)幽門(mén)螺桿菌具有良好的抑菌效果，其MIC為4mg/mL,且抗菌活性與藥物濃度成正比；
　　2.苗藥 HL-1112通過(guò)干擾Hp的抗氧化系統(tǒng)，抑制Hp的毒力因素及影響Hp的能量代謝與生物合成等發(fā)揮其抑菌機(jī)制；
　　3.苗藥 HL-1112影