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文檔簡介
1、目的:檢測HL-1112對幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)的體外抗菌活性,觀察藥物作用前后HL-1112對幽門螺桿菌超微結構的影響及微孔蛋白基因表達水平的變化,為新藥的開發(fā)和臨床合理篩選抗Hp治療提供實驗依據(jù)。
方法:采用瓊脂稀釋法檢測HL-1112對Hp國際標準測序株ATCC700392的最低抑菌濃度(Minimal inhibitory concentrations,MIC)。用含不同濃度(2mg
2、/mL、1mg/mL、500μg/mL、250μg/mL)HL-1112的平板培養(yǎng)Hp,根據(jù)光鏡觀察不同時間點(第2、3、4、5、6天)Hp形態(tài)的改變,選擇形態(tài)改變顯著的HL-1112濃度組及時間,將實驗分組為空白組(未經(jīng)藥物處理的Hp)、阿莫西林對照組(經(jīng)0.64μg/mL阿莫西林作用的Hp)和測試組(經(jīng)2mg/mL HL-1112作用的Hp),制備掃描和透射電鏡樣品,電鏡觀察Hp超微結構的改變。應用實時熒光定量PCR技術檢測HL-1
3、112作用前后,空白組(未經(jīng)藥物處理的Hp)和測試組(經(jīng)2mg/mL HL-1112作用的Hp)Hp微孔蛋白基因omp8、omp32 mRNA表達量的變化。
結果:1、苗藥HL-1112對國際標準測序株Hp ATCC700392的MIC為4mg/mL。2、在光鏡下,空白組Hp隨著培養(yǎng)時間延長,由螺桿狀或短桿狀逐漸變?yōu)閁形、環(huán)形,進而發(fā)生球變。測試組Hp,形態(tài)由斷痕螺桿狀變?yōu)殚L斷痕螺桿狀,長度為空白組細菌的2~3倍,并有部分細菌
4、影子殘留,同時有少量環(huán)形菌及球形菌形成,且藥物濃度越大,形態(tài)改變程度越明顯。3、在電鏡下,測試組Hp球變過程受抑制,較空白組菌體增長,表面有凹陷、打孔,甚至崩解現(xiàn)象出現(xiàn),胞質分布不均或濃縮成團塊狀,胞內(nèi)中心區(qū)域類核區(qū)缺失,U型Hp一側分泌一種高密度物質。阿莫西林組Hp較空白組菌體桿狀菌居多,菌體粗細不一,多數(shù)細菌表面多處囊狀突起,細胞壁、膜破損,胞質電子密度下降。4、熒光定量PCR結果采用2-△△CT法計算,Hp在苗藥HL-1112作用
5、后其微孔蛋白基因omp8、omp32 mRNA表達量分別較空白組上調(diào)2.339倍和2.597倍。
結論:
1、苗藥HL-1112對Hp國際標準測序菌株ATCC700392有明顯的抑菌作用,MIC為4mg/mL。
2、苗藥 HL-1112通過減弱 Hp的球變能力及 Hp結構性群體的形成,影響Hp抗逆生存的能力。
3、苗藥HL-1112通過破壞Hp基本結構或者改變外膜通透性,從而可能引起細胞內(nèi)外離子平
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