消化性潰瘍、胃炎與胃癌幽門螺桿菌蛋白質(zhì)組的差異分析.pdf

1、目的：通過從臨床活檢胃粘膜組織中分離培養(yǎng)幽門螺桿菌（Helicobacter pylori, H.pylori），建立較好的H.pylori雙向電泳樣品制備方法；確立適合H.pylori雙向電泳樣品蛋白定量的方法；建立完善的H.pylori菌體蛋白雙向電泳操作流程；通過比較分析和質(zhì)譜鑒定，初步確定胃癌和消化性潰瘍、胃炎H.pylori蛋白質(zhì)差異點。 方法：選擇2005年3月至2005年9月經(jīng)我院胃鏡及活檢證實為胃癌、消化性潰瘍和

2、胃炎患者（胃粘膜組織經(jīng)快速尿素酶檢查為陽性）的胃竇、胃體粘膜各一塊，通過勻漿接種法于哥倫比亞選擇性固體培養(yǎng)基、微需氧條件下培養(yǎng)H.pylori 72小時，經(jīng)過形態(tài)學、快速尿素酶、革蘭氏染色油鏡下觀察鑒定細菌后，再經(jīng)細菌傳代、保存液低溫液態(tài)保存、哥倫比亞選擇性固體培養(yǎng)基復蘇H.pylori；應用裂解液、超聲破碎法提取H.pylori菌體蛋白質(zhì)后經(jīng)Bradford法進行菌體蛋白質(zhì)定量，采用雙向電泳方法獲得H.pylori菌體蛋白質(zhì)圖像經(jīng)過銀

3、染和考馬斯亮蘭染色法，運用Imagemaster圖像分析軟件找到胃癌與消化性潰瘍、胃炎H.pylori的差異蛋白質(zhì)，通過膠內(nèi)酶解，應用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF）和四極桿飛行時間電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜（Q-TOF）鑒定差異蛋白質(zhì)。最后，通過www.matrixscience.com，從mascot數(shù)據(jù)庫檢索差異蛋白質(zhì)。 結(jié)果：共取材53例進行培養(yǎng)，其中胃癌21例、胃潰瘍12例、胃炎20例。17例H.pylori

4、生長，其余36例在72小時內(nèi)未生長或培養(yǎng)污染。臨床分離標本原代培養(yǎng)H.pylori檢出率為32.1％。培養(yǎng)陽性的17例中，選擇胃癌、胃潰瘍和胃炎各4例（共12例）同時進行H.pylori復蘇，10例H.pylori生長（其中1例胃炎生長較緩慢），2例未生長（胃癌、胃潰瘍各1例），復蘇成功率為83.3％。選擇胃癌、消化性潰瘍和胃炎H.pylori各3例進行雙向電泳，結(jié)果兩次圖像平行性較好，其匹配率達91.75％。與胃潰瘍和胃炎相比較，發(fā)現(xiàn)