肥胖癥小鼠肺部炎癥反應(yīng)中相關(guān)炎癥細(xì)胞α7 nAChR表達(dá)水平的研究.pdf

1、目的:肥胖癥是威脅我國(guó)居民生命健康的重要因素。肥胖癥時(shí)除了機(jī)體脂肪的累積外,伴隨著機(jī)體內(nèi)潛在的肺部促炎與抗炎平衡的改變,這種改變會(huì)影響肺部對(duì)外界刺激的炎癥應(yīng)答狀態(tài)。神經(jīng)免疫調(diào)控對(duì)機(jī)體的炎癥水平起著重要的調(diào)節(jié)作用,已有多項(xiàng)研究證實(shí)膽堿能抗炎通路在膿毒癥中的抗炎調(diào)控作用。α7nAChR是膽堿能抗炎通路的關(guān)鍵受體,我們擬通過(guò)研究肥胖癥小鼠與正常小鼠肺部α7nAChR+細(xì)胞的比例及其α7nAChR表達(dá)強(qiáng)度的差異,及在LPS刺激后上述因素的差異,

2、為研究肥胖癥對(duì)小鼠肺部炎癥反應(yīng)的影響提供新的思路。
　　方法:1、將6周齡C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為肥胖癥組和正常體重組,肥胖癥組給予高脂飲食,正常體重組給予普通飲食,各組小鼠每?jī)芍軠y(cè)一次體重,飼養(yǎng)18周后超過(guò)正常體重組平均體質(zhì)量10％～20％定義為超重,超過(guò)正常體重組平均體質(zhì)量20％定義為肥胖癥。從肥胖癥小鼠和正常體重小鼠中,各隨機(jī)抽出一組小鼠,然后隨機(jī)進(jìn)行生理鹽水或LPS氣管內(nèi)滴入,得到正常體重生理鹽水滴入組,正常體重LPS

3、滴入組,肥胖癥生理鹽水滴入組,肥胖癥LPS滴入組共4組小鼠;2、對(duì)肥胖癥組小鼠和正常體重小鼠進(jìn)行空腹血糖及糖耐量測(cè)定,評(píng)估肥胖癥小鼠與正常小鼠的代謝紊亂情況;3、通過(guò)氣管插管LPS滴入進(jìn)行LPS誘導(dǎo)的肺部炎癥反應(yīng)模型制作,以HE染色評(píng)估模型制作效果;4、通過(guò)HE染色,觀察肥胖癥小鼠和正常小鼠未經(jīng)LPS刺激時(shí)肺部白細(xì)胞浸潤(rùn)情況及LPS刺激后白細(xì)胞浸潤(rùn)情況,評(píng)估四組小鼠之間炎癥反應(yīng)的差異;5、通過(guò)肺組織油紅O染色,觀察肥胖癥小鼠與正常小鼠肺

4、部脂肪顆粒累積情況;6、制備小鼠肺單細(xì)胞懸液,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組小鼠肺部CD45+細(xì)胞亞群比例,并確定肺部α7nAChR表達(dá)水平相對(duì)較高的細(xì)胞亞群,并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)一步分析肥胖癥小鼠與正常小鼠及LPS刺激后相關(guān)細(xì)胞亞群的比例,然后分析這些亞群中的α7nAChR+細(xì)胞亞群比例,及α7nAChR+細(xì)胞亞群中α7nAChR中位表達(dá)強(qiáng)度的差異。
　　結(jié)果:1、經(jīng)過(guò)18周的高脂飲食誘導(dǎo),肥胖癥小鼠體重明顯高于正常小鼠(P＜0.05);

5、2、肥胖癥小鼠與正常小鼠相比空腹血糖水平?jīng)]有明顯差異(P＞0.05),肥胖癥小鼠糖耐量較正常小鼠明顯受損(P＜0.001);3、肺切片HE染色結(jié)果顯示LPS誘導(dǎo)的肺部炎癥模型制作成功;4、HE染色顯示肥胖癥小鼠與正常小鼠相比肺部不存在明顯改變,LPS刺激后肥胖癥小鼠與正常小鼠相比肺部沒(méi)有明顯差異;5、肥胖癥小鼠同正常小鼠相比,肺部脂肪顆粒累積明顯增加。6、流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示中性粒細(xì)胞,單核細(xì)胞,肺泡巨噬細(xì)胞,肺間質(zhì)巨噬細(xì)胞存在α7n

6、AChR+的細(xì)胞亞群。肥胖癥可影響小鼠肺部CD45+細(xì)胞比例,未經(jīng)LPS刺激的肥胖癥小鼠肺部CD45+細(xì)胞比例高于正常小鼠(P＜0.01)。肥胖癥可影響小鼠肺泡巨噬細(xì)胞亞群比例(P＜0.05),未經(jīng)LPS刺激的肥胖癥小鼠肺泡巨噬細(xì)胞亞群比例高于正常小鼠(P＜0.05),且LPS刺激對(duì)肺泡巨噬細(xì)胞比例的影響在正常小鼠與肥胖癥小鼠之間存在差異(P＜0.05)。肥胖癥對(duì)小鼠肺部α7nAChR+肺泡巨噬細(xì)胞、α7nAChR+中性粒細(xì)胞、α7nA

7、ChR+單核細(xì)胞α7nAChR表達(dá)水平?jīng)]有影響(P＞0.05,P＞0.05,P＞0.05),而對(duì)小鼠肺部α7nAChR+肺間質(zhì)巨噬細(xì)胞α7nAChR表達(dá)水平有影響,肥胖癥小鼠與正常小鼠相比α7nAChR+肺間質(zhì)巨噬細(xì)胞α7nAChR表達(dá)水平升高(P＜0.05),這種差異主要由LPS刺激引發(fā)(P＜0.05)。
　　結(jié)論:肥胖癥小鼠同正常小鼠相比CD45+細(xì)胞浸潤(rùn)增加,肺泡巨噬細(xì)胞比例增高,提示肺部炎癥反應(yīng)增強(qiáng)。肥胖癥小鼠同正常小鼠相