綿羊肺炎支原體膜蛋白的二維電泳及質(zhì)譜分析研究.pdf

1、寧夏大學(xué)碩士學(xué)位論文綿羊肺炎支原體膜蛋白的二維電泳及質(zhì)譜分析研究姓名：張濤申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：李敏;謝琴20080401A b s t r a c tM y c o p l a s m a o v i p n e u m o n i a ( M O ) c a l li n f e c ta n d d i s s e r v et h es h e e p ，a l s o i n c l u d e

2、t h el a m ba n d t h eg o a to f o n et O t h r e em o n t h s ，a n di st h em a i n p a t h o g e n st O c a u s eC o n t a g i o u so v i n ep l e u r o p n e u m o n i a ．．M e m b r a n ep r o t e i n sn o to n l y p

3、 l a ya n i m p o r t a n t r o l ei n i t s a n t i g e n i c i t ya n dp a t h o g e n i c ，b u t a l s oi s t h em a i nM O a n t i g e n ．T h em o l e c u l a rb i o l o g yr e s e a r c ho nM O a th o m e a n d a b

4、r o a d ．S Of a r , o n l yh a sm a d es o m el i m i t e dp r o g r e s s ，a n dh a sb e e nn Os i g n i f i c a n tb r e a k t h r o u g h si nt h et r e a t m e n ta n dr e l a t e dd i s e a s e sc o n t r o la n dp

5、r e v e n t i o n ．T h e r e f o r e ，i n t h i s s t u d y , t h ee x t r a c t e d M Om e m b r a n e p r o t e i n W a sa n a l y s e d b y u s i n gt w o ．d i m e n s i o n a le l e c t r o p h o r e s i sa n dm a s

6、ss p e c t r o m e t r y t oo b t a i nt h ep e p t i d es e q u e n c ei n f o r m a t i o no ft h ep a r tp e p t i d e f r a g m e n to f M O m e m b r a n ep r o t e i n w i t ha n t i g e n i c i t y , w h i c hw i

7、l ll a yt h ef o u n d a t i o nf o rt h ef o l l o w - u pr e l a t e d g e n e so b t a i n i n g , a n dn e w v a c c i n e sd e v e l o p i n g ，a n d S Oo n ．T h e r e s u l t so f t h er e s e a r c hw e r e a sf o

8、 I l o w s ：1 ．T h ef o u rm e t h o d s ( D C C ，T r i t o nX ．1 0 0 ，T r i t o n X ．11 4 ，a n dT r i t o nX - 1 0 0 & K Ic o m p o u n d ) f o re x t r a c t i n g M O m e m b r a n ep r o t e i n W a s a n a l y s

9、 e d t h r o u g hS D S —P A G Ea n dw e s t e r n b l o t t i n g ．T h e r e s u l ts h o w e d t h a tt h ep r o t e i nh a d t h e s a m e h y b r i db a n d s ，m o l e c u l a rw e i g h to f t h e b a n d sw e r e 8

10、 2 ．0 7K D a 、6 8 ．11 K D a 、5 5 ．3 0K D a a n d 4 4 ．1 0K D a r e s p e c t i v e l y 。2 ．A p p l i c a t i o n o ft w o - d i m e n s i o n a l e l e c t r o p h o r e s i s t e c h n o l o g y , t h e M Om e m b r a n

11、 e p r o t e i n se x t r a c t e db yt h r e el a t e rm e t h o d sw e l “ ea n a l y s e df u r t h e r ．T h er e s u l t ss h o w e d t h a tt h eT r i t o nX - 1 0 0 & K Ic o m p o u n dw a s b e t t e r t h a n

12、 o t h e r , a n dm o l e c u l a rw e i g h tr a n g e o f t h eM O m e m b r a n e p r o t e i n W a Sb e t w e e n1 2 - 1 2 S K D a , a n di s o e l e c t r i cp o i n t W a sb e t w e e n 4 ．0 —7 ．0 ·3 ．T h r e

13、es t r o n gp o s i t i v e p o i n to fP l ( 1 0 44 - 2 K D a ) ，P 2 ( 8 24 - 2 K D a ) a n dP 3 ( 5 54 - 2 K D a ) O nt w o - d i m e n s i o n a l g e le l e c t r o p h o r e s i sw a ss e l e c t e df i n a l l yt o

14、 d om a s s s p e c t r o m e t r ya n a l y s i so rt h ep a r to fp e p t i d e s e q u e n c i n gt oi d e n t i f y t h e s ep r o t e i n s ．T 1 1 e P M F o f t h e t h r e ep o i n t sa n dp a r to ft h e p e p t i

15、 d es e q u e n c eo f P 1 a n dP 3 w e r e o b t a i n e d ．s oa st o l a yt h e f o u n d a t i o nf o rt h e f o l l o w - u p r e s e a r c h ．K e yw o r d s ：M y c o p l a s m a o v i p n e u m o n i a , m e m b r a