CBS-P2X信號(hào)通路在糖尿病機(jī)械性痛中的作用.pdf

1、目的：
　　糖尿病痛性神經(jīng)病變（Painful diabetic neuropathy，PDN）是糖尿病患者常見的并發(fā)癥之一。它的發(fā)病機(jī)制到目前還不能完全闡述，離子通道的改變可能參與它的發(fā)生發(fā)展。嘌呤受體P2X（purinergic P2X receptors, P2X）作為配體門控非選擇性陽離子通道受體，可被其配體三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)激活，使初級(jí)傳入神經(jīng)元興奮性過度增加，從而激活痛

2、覺通路，最終導(dǎo)致痛覺過敏。硫化氫（hydrogen sulfide,H2S）是痛覺傳遞過程中重要的神經(jīng)調(diào)節(jié)物，它對(duì)痛覺的調(diào)節(jié)與其能夠調(diào)節(jié)電壓門控鈣通道相關(guān)。胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)是在神經(jīng)系統(tǒng)中H2S合成的最主要的酶，故在痛覺傳遞過程中也扮演著重要角色。本研究通過觀察P2X受體亞型P2X3受體、P2X4受體和CBS在糖尿病機(jī)械痛(diabetic mechanical allodyn

3、ia,DMA)大鼠背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglia,DRG)中的時(shí)空動(dòng)態(tài)表達(dá)變化。從而了解PDN的分子機(jī)制，將來能夠?yàn)榕R床治療提供新的方法以及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　將70只健康、雄性的斯普拉格-杜勒（Sprague-Dawley，SD）大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7天，然后隨機(jī)的將它們分為正常組和糖尿病模型組，其中正常組共10只，模型組共60只。接著為模型組大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozotocin,ST

4、Z），選擇一次性的注射方式，劑量為60mg/kg。而正常組僅注射不含有STZ的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，注射的劑量和模型組一致。3天后監(jiān)測(cè)大鼠血糖，如果模型組大鼠血糖高于16.7mmol/L，則表示它們已發(fā)展為糖尿病，但若小于16.7mmol/L，則剔除實(shí)驗(yàn)。在7天時(shí)用von Frey hairs測(cè)得的糖尿病大鼠機(jī)械痛比造模前時(shí)下降50％為DMA模型，造模失敗的大鼠剔除。對(duì)于已經(jīng)成DMA模型的大鼠，則把它們隨機(jī)分成4組，即7天組、14天組

5、、21天組和28天組。要分別在造模前，造模后3天，7天，14天，21天，28天記錄大鼠體重、尾靜脈血糖以及機(jī)械痛等指標(biāo)的動(dòng)態(tài)變化。并通過實(shí)時(shí)定量PCR和westen blotting測(cè)定每組大鼠DRG中P2X3受體的表達(dá)量。通過實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定每組大鼠DRG中的P2X4受體的表達(dá)量以及通過westen blotting測(cè)定每組大鼠DRG中的CBS的表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　（1）糖尿病模型組大鼠與對(duì)照組相比，毛發(fā)發(fā)黃，飲水

6、及飲食量均顯著增多，尿量也明顯增多。（2）模型組大鼠的血糖水平明顯比正常組大鼠血糖水平高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。（3）糖尿病模型組大鼠的體重增加相對(duì)緩慢，正常組體重則增加較快，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。（4）糖尿病模型組大鼠約有50%發(fā)展為機(jī)械痛，DMA大鼠的機(jī)械閾值于STZ注射后3天已開始降低，在第7天時(shí)發(fā)現(xiàn)已降低很明顯，與同時(shí)程的正常組相比，已有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但是在21天和28天時(shí)痛閾值降到了最低點(diǎn)。（5）DMA大

7、鼠DRG中P2X3受體和P2X4受體的mRNA的表達(dá)量在第14天時(shí)顯著增高，與正常組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。DMA大鼠DRG中P2X3受體和CBS的蛋白表達(dá)量在14天、21天、28天組均顯著增高，與正常組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1.一次性大劑量的腹腔注射STZ可誘導(dǎo)SD大鼠產(chǎn)生明顯的三多一少（多飲、多尿、多食、體重下降）癥狀，并可使大鼠產(chǎn)生機(jī)械痛閾值降低和痛覺過敏。2.DMA