p38 MAPK信號系統(tǒng)在糖尿病視網(wǎng)膜病變中作用機制的實驗研究.pdf

1、第一部分高糖對培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞p38 MAPK信號系統(tǒng)表達(dá)的影響 目的：檢測高糖對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞系p38MAPK信號系統(tǒng)表達(dá)的影響，從而探討 p38MAPK 信號系統(tǒng)在高糖誘導(dǎo)糖尿病視網(wǎng)膜血管病變中的作用。 方法：以人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)為研究對象，模擬糖尿病狀態(tài)，以高濃度葡萄糖刺激HUVEC，采用RT-PCR、Western-blot 法檢測細(xì)胞中p38MAPK、轉(zhuǎn)化生長因子β<,2>和基

2、質(zhì)金屬蛋白酶活力和蛋白表達(dá)情況的變化，電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)及流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期的變化。 結(jié)果：高濃度葡萄糖可使內(nèi)皮細(xì)胞中 p38MAPK、MMP-2和 TGFβ<,2>表達(dá)增加，超微結(jié)構(gòu)及細(xì)胞周期發(fā)生變化。 結(jié)論：高糖誘導(dǎo)糖尿病視網(wǎng)膜血管病變可能部分通過p38MAPK信號系統(tǒng)表達(dá)增強。 第二部分p38 MAPK信號系統(tǒng)在實驗性糖尿病倉鼠視網(wǎng)膜中的表達(dá)變化 目的：檢測p38 MAPK信號系統(tǒng)在實驗性糖尿病倉

3、鼠視網(wǎng)膜中表達(dá)的變化，從而探討p38 MAPK信號系統(tǒng)在糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy DR)發(fā)生發(fā)展中的作用及其機制。 方法：用鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)誘導(dǎo)倉鼠糖尿病模型，HE 染色觀察光鏡下視網(wǎng)膜的形態(tài)特征及變化，用免疫組織化學(xué)法檢測正常對照組(非糖尿病動物組)和糖尿病動物模型組視網(wǎng)膜中 TGF-β<,2>的表達(dá)，電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)的變化。血清學(xué)檢測倉鼠血清甘油三酯(TG

4、)、總膽固醇(TC)和電化學(xué)發(fā)光法檢測胰島素水平等變化。提取視網(wǎng)膜中總RNA，半定量RT-PCR觀察視網(wǎng)膜中p38 MAPK、MMP-2和TGFβ<,2>mRNA表達(dá)情況，Western-blot檢測糖尿病倉鼠視網(wǎng)膜中p38 MAPK、MMP-2和TGFβ<,2>蛋白情況。 結(jié)果：糖尿病倉鼠不僅表現(xiàn)為高血糖，還表現(xiàn)為高 TG 血癥。糖尿病倉鼠視網(wǎng)膜內(nèi)TGF-β<,2>表達(dá)呈陽性染色反應(yīng)，視網(wǎng)膜超微結(jié)構(gòu)出現(xiàn)膜盤結(jié)構(gòu)分層，數(shù)量稀少；