Toll樣受體4在下肢缺血再灌注血管損傷中的作用.pdf

1、目的：急性肢體缺血是一種危險性極高的動脈性疾病，發(fā)生后需緊急重建血運，恢復(fù)血流灌注，但血運恢復(fù)后會導(dǎo)致缺血再灌注損傷，不僅可引起局部組織損傷，還可導(dǎo)致遠位器官的損傷，出現(xiàn)多器官功能衰竭。TLRs通過LRRs結(jié)構(gòu)域識別病原體相關(guān)分子模式，進而刺激炎癥因子的生成，參與病原體的殺傷。TLR4受體作為TLRs的一員，在體內(nèi)廣泛分布，幾乎分布于所有的細胞系，主要表達于宿主的防御功能細胞，介導(dǎo)多種疾病，以炎癥反應(yīng)為主，誘導(dǎo)多種炎癥因子基因表達。TL

2、R4在多種器官缺血再灌注損傷中有重要作用，如肝、腎、脊髓、大腦等器官，可以啟動免疫反應(yīng)和引發(fā)炎性反應(yīng)，敲除TLR4基因后可明顯減輕缺血再灌注損傷。但TLR4在缺血再灌注血管損傷中的作用尚不清楚，本實驗擬證明TLR4在小鼠下肢缺血再灌注血管損傷中的作用。
　　方法：⑴血流動力學(xué)實驗:本研究采用橡皮圈繞扎法建立小鼠下肢缺血再灌注模型，將C57BL/6J小鼠隨機分為模型對照組(control)、缺血組(Ischemia)和再灌注模型組(

3、Reperfision)，激光多普勒血流成像儀分別檢測各組血流灌注情況。⑵缺血再灌注損傷實驗:將C57BL/6J小鼠隨機分為模型對照組(control)和缺血再灌注組(IR)，免疫組化檢測TLR4、HMGB1、TNF-α及IL-6的表達，RT-PCR檢測TNF-α、IL-6的表達，TUNEL技術(shù)檢測血管壁細胞凋亡情況。⑶TLR4實驗:將小鼠缺血再灌注模型分為野生(WT)模型組和TLR4基因敲除（TLR4-/-）模型組，RT-PCR檢測T

4、NF-α、IL-6的表達，TUNEL技術(shù)檢測血管壁細胞凋亡情況。
　　結(jié)果：①采用橡皮圈繞扎法成功建立小鼠下肢缺血再灌注模型，橡皮圈套扎后術(shù)側(cè)后爪皮膚立即蒼白，溫度降低，F(xiàn)lux迅速下降，健側(cè)肢體后爪未出現(xiàn)以上表現(xiàn)。再灌注后術(shù)側(cè)后爪出現(xiàn)腫脹，皮溫升高，F(xiàn)lux逐漸升高。②缺血再灌注損傷實驗中，IR組血管組織的TLR4、HMGB1、TNF-α和IL-6的表達及凋亡情況較control組明顯升高(P＜0.01)。③TLR4基因敲除后，