缺血再灌注大鼠腦微血管損傷機制研究.pdf

1、缺血性腦卒中是老年人的常見疾病，具有高發(fā)病率、高死亡率、高致殘率的特點。且每年都呈上升的趨勢，嚴重危害著人類健康，并給社會和家庭造成沉重的精神和經(jīng)濟壓力。在卒中的治療方面，溶栓治療是目前公認有效的治療措施。但由于該方法時間窗短，繼發(fā)腦出血風險大，限制了其在臨床上應用。對于腦保護的研究成為目前腦卒中研究的熱點之一，將溶栓治療和腦保護治療結合在一起是今后卒中治療的方向。
　　 目前對于缺血性腦卒中的腦保護治療多集中在改善腦部循環(huán)、抗

2、自由基、抗興奮性氨基酸等方面，而微血管的損傷可加重腦水腫，引起梗死后出血轉化，導致炎性細胞浸潤和炎癥因子進一步釋放，形成炎癥的發(fā)大和正反饋。因此微血管構成的血腦屏障結構在缺血性腦卒中神經(jīng)損害中起至關重要的作用，日益成為缺血性腦卒中治療的新的靶點；同時Rho激酶是一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，Rho/Rho激酶系統(tǒng)可通過下游效應因子對細胞的分裂、收縮、粘附、遷移、分泌等活動具有重要調節(jié)作用，在缺血性腦血管病中，Rho/Rho激酶系統(tǒng)可以促進

3、炎性因子釋放，介導缺血后炎癥反應發(fā)生。目前對于Rho激酶在缺血性腦卒中介導微小血管損傷及具體機制探討少有相關研究報道。
　　 本研究旨在運用線拴法制備大鼠缺血再灌注模型通過觀察不同時間點Rho激酶、S100B、基質金屬蛋白酶(MMP)之間表達相關性及與腦微血管損傷的關系，探討Rho激酶通過調節(jié)S100B、基質金屬蛋白酶(MMP)的表達而介導了大鼠缺血再灌注后微血管的損傷，為Rho激酶成為缺血性腦卒中微血管損傷新的靶點提供了實驗依

4、據(jù)。
　　 第一部分缺血再灌注不同時間點Rho激酶表達的變化及與微血管損傷的關系
　　 目的：觀察大鼠缺血再灌注模型(MCAO)不同時間點Rho激酶表達的變化及與微血管損傷的關系。
　　 方法：將在我校實驗動物中心購得的雄性SD大鼠隨機分為5組：假手術組、MCAO6、24、48、72h模型組，每組各15只。并分別運用線栓法制作大鼠右側大腦中動脈閉塞的缺血再灌注6、24、48、72h模型。本部分試驗運用RT-PCR

5、檢測假手術組、MCAO組缺血90分鐘再灌注6、24、48、72h Rho激酶mRNA水平的變化，并于各再灌注時間點處死大鼠后取梗死側缺血半暗帶腦組織測定伊文思藍(EB)含量來觀察血腦屏障的通透性的改變；免疫組化染色及層粘蛋白(Laminin)表達水平測定，并觀察他們之間的關系。
　　 結果：大鼠神經(jīng)功能缺損評分缺血再灌注6、24、48、72h四組與假手術組相比，有顯著差異(P＜0.01)；各模型組之間神經(jīng)功能評分相比較無顯著差異

6、(P＞0.05)。Rho激酶mRNA表達、EB含量、Laminin表達在各組間差異均具有顯著性(P＜0.05)；缺血再灌注6、24、48、72h四組與假手術組相比均有顯著性差異(P＜0.01)。Rho激酶mRNA表達、EB含量均于缺血再灌注的早期(6h)開始逐漸升高，在再灌注48h時達到高峰，此后逐漸下降；Laminin表達在缺血再灌注的早期開始逐漸下降，在再灌注48h時達到最低點，此后逐漸上升。Rho激酶mRNA表達與EB含量呈直線相

7、關，r=0.925，P=0.025＜0.05；Rho激酶表達與Laminin表達直線相關，r=-0.955，P=0.011＜0.05； EB含量與Laminin表達直線相關，r=-0.982，P=0.003＜0.01。
　　 結論：在缺血再灌注不同時間Rho激酶的表達和微血管損傷之間具有相關性。
　　 第二部分缺血再灌注大鼠腦微血管損傷的機制探討
　　 目的：選取缺血90分鐘再灌注24小時時間點，通過Rho激酶抑

8、制劑干預，觀察S100B、MMP-9表達的變化及關系，初步探討Rho激酶介導微血管損傷中的的發(fā)生機制；并觀察Rho激酶抑制劑對大鼠缺血再灌注微血管損傷的保護作用。
　　 方法：將在我校實驗動物中心購得的雄性SD大鼠30只隨機分為3組：假手術組、MCAO模型組、Rho激酶抑制劑干預組，同實驗第一部分制作大鼠右側大腦中動脈閉塞的缺血再灌注24h模型。運用實時定量RT-PCR測定法檢測三組中大鼠缺血半暗帶腦組織S100B蛋白、MMP-

9、9 mRNA水平的變化及關系；觀察Rho抑制劑干預組大鼠神經(jīng)功能缺損評分、伊文思藍含量、Laminin表達水平、腦組織含水量，并與假手術組、MCAO模型組作對照。
　　 結果：大鼠神經(jīng)功能缺損評分、EB含量、Laminin表達水平、腦組織含水量，在缺血再灌注24h組較假手術組相比差異有顯著性(P＜0.05)；Rho激酶抑制劑組與缺血再灌注24h組相比差異有顯著性(P＜0.05)。缺血半暗帶腦組織S100B蛋白、MMP-9 mRN