失血性休克誘發(fā)兔心肌損傷時(shí)縫隙連接蛋白43表達(dá)的變化及丙泊酚的干預(yù)效應(yīng).pdf

1、目的：失血性休克(Hemorrhagicshock,HS)常見于嚴(yán)重創(chuàng)傷和手術(shù)出血，是臨床上十分危急的病癥，若未經(jīng)及時(shí)治療，可導(dǎo)致死亡。HS主要以全身血容量驟減、組織灌注減少、細(xì)胞缺氧、無(wú)氧代謝增加及乳酸堆積，氧自由基和代謝產(chǎn)物生成增多為主要特征，造成細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷，嚴(yán)重者可導(dǎo)致器官功能障礙，甚至衰竭。盡管心肌細(xì)胞對(duì)缺血缺氧有較強(qiáng)的耐受力，但嚴(yán)重休克時(shí)仍會(huì)表現(xiàn)為收縮功能下降、心輸出量減少，進(jìn)而加重其他臟器損傷。丙泊酚是臨床常用的靜脈麻

2、醉藥，具有對(duì)抗氧自由基和抑制細(xì)胞凋亡的作用。研究表明丙泊酚對(duì)失血性休克和缺血-再灌注心肌損傷具有明顯的保護(hù)作用?？p隙連接蛋白43(Connexin43,Cx43)是心肌細(xì)胞縫隙連接的主要蛋白，Cx43的空間分布、數(shù)量及磷酸化異常均可影響縫隙連接電耦聯(lián)，影響心肌同步收縮功能。研究表明，急性心肌缺血后Cx43會(huì)發(fā)生重構(gòu)，主要表現(xiàn)為蛋白表達(dá)下降，分布模式以及磷酸化的改變。本研究擬探討丙泊酚對(duì)失血性休克兔心肌損傷時(shí)Cx43表達(dá)的影響，為明確丙泊

3、酚心肌保護(hù)的作用機(jī)制提供參考。
　　方法：健康清潔級(jí)雄性新西蘭白兔24只，5～7月齡，體重2.5～3.0kg，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。采用隨機(jī)數(shù)字表法，將其分為3組(n=8)：假手術(shù)(S)組、失血性休克(HS)組及丙泊酚處理(P)組。
　　取兔稱重后置于兔籠中沿右側(cè)耳緣靜脈注射3％戊巴比妥鈉30mg/kg，麻醉成功后將兔仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上。手術(shù)部位備皮消毒，1%利多卡因浸潤(rùn)麻醉后剪開頸部正中皮膚，分離氣管，行氣管切

4、開插管術(shù)(ID=3.0mm)并保留自主呼吸；分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，用24G套管針插入右側(cè)頸總動(dòng)脈并用絲線固定，連接M1567A有創(chuàng)血壓測(cè)壓套裝，再與PhilipsG60多功能監(jiān)護(hù)儀連接持續(xù)監(jiān)測(cè)動(dòng)脈血壓（BP）和平均動(dòng)脈壓（MAP）。1%利多卡因浸潤(rùn)麻醉后于兔左、右側(cè)股三角區(qū)分別斜行3cm剪開皮膚，暴露并分離雙側(cè)股動(dòng)靜脈，用24G套管針分別置入左側(cè)股動(dòng)脈和右側(cè)股靜脈并用絲線固定，連接三通用于放血、采集動(dòng)脈血樣和輸血、給藥。置管完成后靜脈給予肝

5、素鈉3mg/kg。S組僅行氣管切開插管術(shù)、右側(cè)頸總動(dòng)脈和股動(dòng)靜脈穿刺置管術(shù)，不放血；P組于放血前10min經(jīng)右側(cè)股靜脈注射丙泊酚5mg/kg，并用微量注射泵以20mg·kg-1·h-1的速度持續(xù)輸注至休克后120min；S組及HS組靜脈輸注等容量生理鹽水。
　　采用Wigger’s改良法經(jīng)左側(cè)股動(dòng)脈放血，10min內(nèi)使MAP降至40mmHg，放血量約為全身血容量的30~50%，觀察兔血壓波動(dòng)，通過放血和回輸血液維持MAP在35~4

6、5mmHg之間以達(dá)休克狀態(tài)并維持120min，制備失血性休克動(dòng)物模型。
　　于放血前即刻(T0)、休克30min(T1)、60min(T2)、90min(T3)和120min(T4)采集動(dòng)脈血樣測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)血漿cTnI濃度及動(dòng)脈血乳酸水平。于T4采血后，連接HX-200動(dòng)物呼吸機(jī)行機(jī)械通氣，快速打開胸腔，取心尖部心肌組織并一分為二，一半置于EP管中液氮凍存24h，再轉(zhuǎn)?80oC冰箱保存待測(cè)；另一半組織用4℃4%多聚甲醛溶液固定待測(cè)

7、。
　　采用ELISA法測(cè)定兔血漿cTnI濃度；采用自動(dòng)血?dú)夥治鰞x檢測(cè)動(dòng)脈血乳酸水平；取4%多聚甲醛溶液固定的心肌組織，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察心肌病理?yè)p傷并行損傷評(píng)分；取?80℃冰箱凍存的心肌組織采用Westernblot法檢測(cè)兔心肌組織Cx43表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、與S組比較，HS組與P組兔血漿cTnI濃度升高（P<0.05）；與HS組比較，P組兔血漿cTnI濃度降低（P<0.05）；與T

8、0比較，HS組和P組T1-4時(shí)兔血漿cTnI濃度逐漸升高（P<0.05）。
　　2、與S組比較，HS組與P組兔動(dòng)脈血乳酸水平升高（P<0.05）；與HS組比較，P組兔動(dòng)脈血乳酸水平降低（P<0.05）；與T0比較，HS組和P組T1-4時(shí)兔動(dòng)脈血乳酸水平逐漸升高（P<0.05）。
　　3、S組心肌細(xì)胞形態(tài)正常，肌纖維排列整齊，細(xì)胞核均勻一致；HS組心肌細(xì)胞腫脹，纖維排列不規(guī)則或斷裂，間質(zhì)內(nèi)有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，胞核崩解；P組心肌

9、細(xì)胞輕度變性，少量心肌纖維斷裂，細(xì)胞間隙略增寬，病理?yè)p傷較HS組減輕。與S組比較，HS組和P組心肌損傷評(píng)分升高(P<0.05)；與HS組比較，P組心肌損傷評(píng)分降低(P<0.05)。
　　4、與S組比較，HS組和P組心肌Cx43含量減少(P<0.05)；與HS組比較，P組心肌Cx43含量增加(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、股動(dòng)脈放血法可成功制備失血性休克動(dòng)物模型。
　　2、失血性休克可引起心肌損傷并使心肌細(xì)