質(zhì)粒用于乙型肝炎病毒DNA定量檢測室內(nèi)質(zhì)量控制的效果評價.pdf

1、目的：熒光定量PCR技術(shù)特異性強、靈敏度高，已被廣泛應(yīng)用于乙型肝炎病毒（HBV）DNA的定量檢測，在HBV診治及預(yù)后判斷中有重要的應(yīng)用價值，而嚴格的室內(nèi)質(zhì)量控制措施是其檢測結(jié)果準確可信的重要保障。為此，本研究采用基因工程方法，自制了HBV DNA定量PCR檢測室內(nèi)質(zhì)控品，并對其在臨床常規(guī)工作中的使用價值進行初步評價。
　　方法：選取GeneBank數(shù)據(jù)庫中HBV全基因組序列共65條，涵蓋了HBV A-H八個基因型序列。經(jīng)Clust

2、alX2軟件對HBV各個基因型序列進行多序列比對分析后，選擇保守序列S區(qū)設(shè)計引物，擴增得到目的基因片段后將其插入pEASY-T1載體構(gòu)建重組質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒用血清稀釋成107 copies/ml、104 copies/ml兩個水平室內(nèi)質(zhì)控品，初定靶值后用Excel繪制質(zhì)控圖并觀察精密度，進行室內(nèi)質(zhì)控品的評估。
　　結(jié)果：HBV S區(qū)序列已亞克隆到pEASY-T1載體，測序結(jié)果與目的片段一致。對序列進行NCBI BLAST特異性分析