小鼠海馬區(qū)液壓沖擊顱腦損傷模型分型相關(guān)研究.pdf

1、目的: 顱腦損傷動(dòng)物模型是研究顱腦損傷機(jī)制和診療方法的重要的基礎(chǔ)平臺(tái)。因?yàn)樾∈缶哂谢蛐蛄信c人類較為接近、易于進(jìn)行轉(zhuǎn)基因研究、成本低等優(yōu)點(diǎn)，所以小鼠是最常用于制作小動(dòng)物顱腦損傷模型的動(dòng)物之一。目前國(guó)內(nèi)外已經(jīng)發(fā)展了許多種方法來(lái)建立小鼠顱腦損傷模型，其中液壓打擊法是最常使用的方法之一。海馬損傷在臨床上具有重要意義，但是國(guó)內(nèi)外對(duì)于如何建立不同程度小鼠海馬區(qū)液壓沖擊顱腦損傷鮮有系統(tǒng)性的研究。本研究使用標(biāo)準(zhǔn)化的手術(shù)方法和國(guó)際通用的液壓打擊儀，建立

2、穩(wěn)定的不同程度小鼠海馬區(qū)液壓沖擊顱腦損傷模型，明確打擊部位和打擊力度等。為進(jìn)一步深入開展創(chuàng)傷性顱腦損傷的相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　 方法: 健康成年雄性C57/BL6小鼠180只，體質(zhì)量20g-25g。隨機(jī)分為對(duì)照組(n=30)，實(shí)驗(yàn)組:輕型打擊創(chuàng)傷組(n=50)、中型打擊創(chuàng)傷組(n＝50)、重型打擊創(chuàng)傷組(n=50)。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組都進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的手術(shù)步驟。利用小鼠腦立體定位圖譜對(duì)小鼠海馬結(jié)構(gòu)進(jìn)行空間定位。選擇前囟點(diǎn)

3、后方2mm，矢狀縫右側(cè)2mm作為圓心，用磨鉆磨出一個(gè)直徑為2mm的骨孔，作為連接打擊帽和打擊的位置。對(duì)照組小鼠僅行頭皮切開和磨除骨窗，保持硬膜完整，不進(jìn)行液壓打擊致傷，實(shí)驗(yàn)組用液壓打擊致傷。輕型組、中型組、重型組小鼠液壓打擊壓力分別為0.6-0.8atm，1.6-1.8atm，2.6-2.8atm;沖擊時(shí)程約為20ms。造模后按照不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行生命體征監(jiān)測(cè)、mNSS神經(jīng)功能評(píng)分、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)、大體標(biāo)本觀測(cè)、TTC染色、HE染色

4、、和小動(dòng)物頭部MRI檢查等。
　　 結(jié)果: 經(jīng)過(guò)對(duì)致傷后小鼠的觀測(cè)證實(shí):打擊力度越大，腦損傷越重，損傷后死亡率越高，行為學(xué)評(píng)分越低，腦水腫程度越重，腦挫裂傷灶和MRI影像學(xué)改變?cè)矫黠@。各組小鼠腦損傷后大腦皮層、蛛網(wǎng)膜下腔、腦挫裂傷灶周圍皮層及皮層下白質(zhì)均有不同程度出血，損傷越重，出血越明顯。小鼠腦損傷后空間定位和記憶功能受損。TBI后各實(shí)驗(yàn)組小鼠死亡率存在顯著差異(X2=27.17，P＜0.05);各組小鼠TBI后mNSS評(píng)分均

5、明顯升高，隨著小鼠傷情恢復(fù)，mNSS評(píng)分也呈逐漸下降趨勢(shì);各組小鼠逃避潛伏期存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=12.45，P＜0.05）;各組小鼠目標(biāo)象限百分率之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=3.537，P＜0.05)。
　　 結(jié)論: 借助本組實(shí)驗(yàn)選用的液壓打擊儀系統(tǒng)建立的小鼠海馬區(qū)液壓沖擊顱腦損傷模型具有致傷部位精確、致傷程度穩(wěn)定、重復(fù)性好、個(gè)體隨機(jī)誤差小的特點(diǎn)。經(jīng)過(guò)反復(fù)實(shí)踐，我們總結(jié)出了建立小鼠海馬區(qū)液壓沖擊顱腦損傷模型的標(biāo)準(zhǔn)化操作步驟。小鼠

6、海馬區(qū)液壓沖擊顱腦損傷模型制造的打擊創(chuàng)傷可以明確分級(jí)，并且不同嚴(yán)重級(jí)別創(chuàng)傷的傷后神經(jīng)功能表現(xiàn)和恢復(fù)過(guò)程各有特點(diǎn)，表明本模型可以穩(wěn)定地制造不同程度創(chuàng)傷。為創(chuàng)傷性顱腦損傷的深入研究提供優(yōu)良的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。小動(dòng)物MRI動(dòng)態(tài)連續(xù)觀察可以客觀地觀察TBI后小鼠創(chuàng)傷部位、程度、轉(zhuǎn)歸等，從而對(duì)小鼠海馬區(qū)液壓沖擊顱腦損傷模型進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估。TTC染色對(duì)判斷創(chuàng)傷傷道具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。創(chuàng)傷后各組小鼠在早期神經(jīng)功能恢復(fù)較快，但長(zhǎng)期神經(jīng)功能缺失恢復(fù)較慢甚至無(wú)法恢復(fù)