EV71IgM AlphaLISA檢測(cè)方法的初步建立.pdf

1、腸道病毒71型(EV71)屬于小核糖核酸病毒，感染后可引起手足口病(hand-foot-mouth disease，HFMD)，部分患兒可引起一系列中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，出現(xiàn)重癥病例和死亡病例。因此，建立一種可以快速均相檢測(cè)EV71 IgM抗體的方法在HFMD早期診斷中顯得尤為重要。
　　 根據(jù)HFMD發(fā)病特點(diǎn)，我們建立了具有高敏感性、精確性、均一性、背景低、廣泛的動(dòng)態(tài)檢測(cè)范圍、無需洗滌及樣本需求量極少等特點(diǎn)的針對(duì)EV71 IgM

2、的AlphaLISA檢測(cè)技術(shù)。
　　 在本實(shí)驗(yàn)中，我們成功的表達(dá)純化了EV71 VP11-297及EV71 VP11-177重組蛋白，經(jīng)鑒定后將抗原生物素化。通過ELISA法摸索出生物素化的EV71 VP1的最適量為37.5ng。優(yōu)化供體微珠、受體微珠、血清量等實(shí)驗(yàn)條件，初步建立了基于VP1的EV71 IgM抗體的AlphaLISA檢測(cè)方法。
　　 我們首先使用ELISA法對(duì)10份健康人的血清和30份手足口病病人（30份

3、手足口病病人核酸檢測(cè)EV71均為陽性）的血清進(jìn)行評(píng)價(jià)，健康人的血清中EV71 IgM檢測(cè)均為陰性，30份手足口病病人的血清中EV71 IgM陽性為16份。然后用建立的AlphaLISA方法體系對(duì)上述樣本進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示：在10個(gè)健康人中，AlphaLISA方法檢測(cè)EV71 IgM也為陰性。在30份手足口病病人血清中，ELISA方法檢測(cè)出的16份EV71 IgM陽性的樣本，AlphaLISA方法檢測(cè)EV71 IgM均為陽性，然而Al