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文檔簡介
1、手足口病是兒童常見病,多種腸道病毒均可引起手足口病,其中以腸道病毒71型(EV71)為我國近幾年手足口病的主要病原體。EV71導(dǎo)致的手足口病較常引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷,重癥患者比例以及病死率均明顯高于其他腸道病毒,具有很重要的公共衛(wèi)生意義。目前尚未有成熟的EV71快速診斷試劑和預(yù)防疫苗,開發(fā)相關(guān)診斷試劑與疫苗對于手足口病的防治具有重要意義。本研究目的是建立腸道病毒的分離鑒定技術(shù)平臺,獲得較為完整的EV71病毒庫;建立新型的EV71中和抗體
2、快速高通量檢測方法;建立EV71動(dòng)物感染模型。本研究結(jié)果將為EV71的防治研究提供重要的基礎(chǔ)和工具。 本研究通過病毒分離鑒定建立了一個(gè)較為完整的腸道病毒庫,并且初步建立了EV71病毒的大規(guī)模生產(chǎn),濃縮和純化的工藝流程,已獲得了具有較高滴度和純度的EV71病毒顆粒。 本研究建立了一系列EV71鑒定的方法,包括EV71滴度檢測方法,免疫熒光方法,EV71中和抗體檢測方法等。傳統(tǒng)的TCID50方法是目前常用的EV71中和抗體的
3、檢測方法,該方法的實(shí)驗(yàn)周期長,工作量大,肉眼判斷結(jié)果存在主觀誤差,難以滿足大量標(biāo)本的檢測要求。鑒于傳統(tǒng)TCID50方法所存在的問題,我們建立了快速、高通量的新型EV71中和抗體檢測方法。本方法是應(yīng)用酶標(biāo)記的EV71單克隆抗體與EV71病毒蛋白結(jié)合,通過TMB顯色使得被EV71感染的細(xì)胞顯示出區(qū)別顏色標(biāo)記,應(yīng)用斑點(diǎn)自動(dòng)掃描儀進(jìn)行掃描和計(jì)數(shù)。本研究對該方法的敏感性,特異性,交叉反應(yīng)性和重復(fù)性進(jìn)行了考察,結(jié)果表明該方法具有較好的性能。同時(shí)我們
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