糖尿病前期血小板miR--103b水平變化的臨床意義及功能研究.pdf

1、目的：研究表明，miR-103與2型糖尿病胰島素抵抗及糖代謝密切相關(guān)。循環(huán)SFRP4水平是獨立于其它已知糖尿病風(fēng)險因子的糖尿病超前診斷標(biāo)志物。最近研究揭示，血小板富含miR-103b，然而其具體分子調(diào)控機理仍不清楚。本研究擬查明miR-103b對SFRP4靶向調(diào)控關(guān)系，深入調(diào)查糖尿病前期人群及糖尿病患者血小板miR-103b及其靶標(biāo)SFRP4的水平變化及作用機制，探討血小板miR-103b作為糖尿病前期潛在分子標(biāo)記物的臨床意義。

2、　　方法：收集2014年10月～2016年6月我校附屬醫(yī)院就診人群，分組為糖尿病前期人群組(pre-DM，n=48)，糖尿病無并發(fā)癥患者(NCDM，n=47)以及正常健康人群(n=50)的外周血樣。利用MACS免疫磁珠分離純化制備去白細(xì)胞血小板樣本;qRT-PCR檢測血小板miR-103b及SFRP4mRNA水平變化;ELISA檢測血小板SFRP4蛋白水平;結(jié)合生物信息學(xué)分析和熒光素酶報告基因?qū)嶒炑芯縨iR-103b對SFRP4的靶向調(diào)

3、控作用，進而體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-103b模擬物(mimics)、miR-103b抑制劑(inhibitors)及相應(yīng)陰性對照(NC)驗證靶向調(diào)控關(guān)系;Person分析血小板miR-103b和SFRP4水平的臨床相關(guān)性，并且應(yīng)用受試者工作特征(ROC)曲線評估血小板miR-103b對糖尿病前期的診斷意義。
　　結(jié)果：miR-103家族成員具有高度保守性，其中miR-103b定位于人染色體5q34。并且，miR-103b能夠直接結(jié)合S

4、FRP4mRNA3'-UTR區(qū)從而直接靶向負(fù)調(diào)控SFRP4表達(dá)。miR-103b在pre-DM人群血小板中表達(dá)水平顯著低于Control組，并且NCDM組血小板miR-103b水平也顯著低于Control組。相對的，pre-DM組和NCDM組血小板SFRP4mRNA和蛋白水平則顯著高于Control組。Person相關(guān)性分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)各組中血小板SFRP4與miR-103b表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)性。ROC曲線分析結(jié)果顯示，血小板miR-10