沉默F(xiàn)EN1增強(qiáng)CDDP對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞化療的敏感性.pdf

1、背景：瓣?duì)詈怂醿?nèi)切酶1（FEN1）在DNA復(fù)制和修復(fù)中起關(guān)鍵作用，許多研究證實(shí)其表達(dá)水平與癌癥的發(fā)展和預(yù)后相關(guān)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)FEN1的表達(dá)水平與胃癌患者的預(yù)后及發(fā)展相關(guān)；同時(shí)發(fā)現(xiàn)下調(diào)FEN1，可抑制胃癌SGC-7901細(xì)胞的生長(zhǎng)和促進(jìn)細(xì)胞凋亡，意味著FEN1可能會(huì)成為治療胃癌的潛在靶點(diǎn)。而且，已有研究表明FEN1的抑制劑可增強(qiáng)DNA烷化劑化療的敏感性。這些結(jié)果提示了FEN1可能會(huì)成為增強(qiáng)DNA烷化劑等化療藥臨床治療的一個(gè)有效靶點(diǎn)

2、。然而，關(guān)于FEN1與CDDP之間的具體關(guān)系，還缺乏更深層次的研究。本課題擬在前期工作基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究FEN1是否可作為增強(qiáng)CDDP對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞化療敏感性的靶點(diǎn)，為FEN1作為胃癌個(gè)性化、靶向性治療的新靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論支持。
　　目的：探討利用RNA干擾技術(shù)特異性沉默胃癌SGC-7901細(xì)胞的FEN1對(duì)CDDP化療敏感性的影響。
　　方法：
　　1.以CDDP作為誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)FEN1的表達(dá)，通過(guò)We

3、stern-blot驗(yàn)證FEN1的表達(dá)水平，探討CDDP是否可誘導(dǎo)FEN1的表達(dá)上調(diào)。
　　2.使用實(shí)驗(yàn)前期成功構(gòu)建的特異性FEN1-siRNA靶向序列，NC-siRNA及未轉(zhuǎn)染組（Untransfected組）作為對(duì)照組，Western-blot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染胃癌SGC-7901細(xì)胞后的FEN1蛋白表達(dá)以期檢測(cè)抑制率。
　　3.MTT法分別檢測(cè)FEN1-siRNA+CDDP實(shí)驗(yàn)組、NC-siRNA+CDDP及Untransf

4、ected+CDDP組對(duì)照組胃癌SGC-7901細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖活性。即在不同的實(shí)驗(yàn)分組中分別予以不同濃度CDDP和10μ MCDDP予以不同時(shí)間間隔處理。
　　4.利用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)FEN1-siRNA+CDDP聯(lián)合組、NC-siRNA+CDDP處理組及Untransfected+CDDP處理組的胃癌SGC-7901細(xì)胞株的細(xì)胞凋亡率變化；同時(shí)利用Western Blot方法檢測(cè)各組Bcl-2、Bcl-xl和Bax的蛋白

5、表達(dá)水平變化。
　　結(jié)果：
　　1.Western Blot結(jié)果顯示FEN1的蛋白表達(dá)水平隨著CDD P的濃度增加(0，10,20,30,40,50μM CDDP處理48h)及時(shí)間延長(zhǎng)(30μM CDDP處理時(shí)間為24h,48h和72h)而呈依賴性增加（P<0.05）。
　　2.Western-blot方法檢測(cè)結(jié)果顯示，試驗(yàn)組FEN1-siRNA組細(xì)胞中的FEN1的蛋白表達(dá)明顯低于NC-si RNA及Untra nsf

6、ected兩個(gè)對(duì)照組（P<0.05）。
　　3.MTT法結(jié)果顯示FEN1-siRNA+CDDP聯(lián)合組的胃癌SGC-7901細(xì)胞株在不同的CDDP濃度(0,2.5,5,10,20,30,40和50μM)和10μM CDDP予以不同時(shí)間(24h,48和72h)處理的條件下，其細(xì)胞生存率均明顯低于NC-siR NA+CDDP及 Untransfected+CDDP兩個(gè)對(duì)照組(P<0.05)。
　　4.流式檢測(cè)結(jié)果顯示，F(xiàn)EN1-s

7、iRNA+CDDP聯(lián)合組的胃癌 SGC-7901細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率顯著高于NC-siRNA+CDDP及Untransfected+CDDP兩個(gè)對(duì)照組（P<0.05）。同時(shí),Western-blot方法結(jié)果顯示，在FEN1-siRNA+CDDP聯(lián)合組中，其Bcl-2及Bcl-xl的蛋白表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組；相反，Bax蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。
　　結(jié)論：在CDDP的誘導(dǎo)條件下，F(xiàn)EN1的蛋白表達(dá)水平顯著地被上調(diào)，