NGAL在單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎臟的表達(dá)及促肝細(xì)胞生長素對其影響.pdf

1、目的：腎間質(zhì)纖維化在慢性腎功能衰竭的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。眾多錯綜復(fù)雜的細(xì)胞因子及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與了腎間質(zhì)纖維化發(fā)生和發(fā)展的過程，探討其具體機(jī)制可為防治腎間質(zhì)纖維化提供理論依據(jù)。已有研究發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞生長因子(Hepatocyte growth factor，HGF)是內(nèi)源性的逆轉(zhuǎn)或延緩腎間質(zhì)纖維化進(jìn)程的因子，它可能通過多種途徑發(fā)揮其生物活性，既往的研究多集中于其對轉(zhuǎn)化生長因子(Transforming growth factor-β

2、，TGF-β)的表達(dá)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的干預(yù)方面。最近研究發(fā)現(xiàn)腎小管上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)在腎間質(zhì)纖維化發(fā)生發(fā)展中起到關(guān)鍵作用，而HGF可能阻斷EMT，使生成間質(zhì)成分的肌成纖維細(xì)胞來源減少，從而減輕甚至逆轉(zhuǎn)纖維化。中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(neutrophilzelatinase-associated lipocalin，NGAL)最初發(fā)現(xiàn)是急性腎損傷的標(biāo)志物，近來越來

3、越多的文獻(xiàn)報(bào)道可能參與了腎間質(zhì)纖維化過程，而且參與腎小管上皮細(xì)胞EMT，不但可以早期預(yù)測腎間質(zhì)纖維化，同時能夠維持腎小管上皮細(xì)胞的表型，阻止其向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化。應(yīng)用“微點(diǎn)陣分析(microarray)”發(fā)現(xiàn)HGF可誘導(dǎo)腎髓質(zhì)集合管細(xì)胞NGAL的表達(dá)。而在動物實(shí)驗(yàn)中，HGF是否可以通過誘導(dǎo)腎臟NGAL的表達(dá)，實(shí)現(xiàn)對EMT，或者纖維化其他途徑的干預(yù)，目前未見文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過檢測NGAL在單側(cè)輸尿管結(jié)扎(unilateral uretera

4、l obstruction，UUO)大鼠腎臟中的表達(dá)；并應(yīng)用外源性HGF給予干預(yù)，研究HGF、NGAL與E-鈣粘蛋白(E-cadherin，E-cad)之間的關(guān)系，探討HGF及NGAL，與“腎臟損傷-修復(fù)-纖維化”的相關(guān)機(jī)制，從而為治療腎臟纖維化提供新的思路。
　　方法：選擇清潔級健康雄性SD大鼠72只，體重200±20g，隨機(jī)將其分為3組，每組24只：(1).假手術(shù)組(Sham組)。游離左側(cè)輸尿管但不結(jié)扎，每日腹腔注射生理鹽水；

5、(2).輸尿管結(jié)扎組(UUO組)。行左側(cè)輸尿管結(jié)扎，每日腹腔注射生理鹽水；(3).促肝細(xì)胞生長素干預(yù)組(pHGF組)，行左側(cè)輸尿管結(jié)扎，每日腹腔注射促肝細(xì)胞生長素pHGF0.5mg/(Kg·d)。三組均于術(shù)前1天開始給藥，其中Sham組和UUO組給予等容積生理鹽水，直至術(shù)后第14天。實(shí)驗(yàn)期間自由進(jìn)食水。術(shù)后第1、4、7、14天各組隨機(jī)選取6只大鼠，獲取左側(cè)腎臟，制作切片。分別用蘇木素伊紅(HE)和Masson染色，在光鏡下觀察大鼠腎組織

6、病理變化；采用免疫組織化學(xué)方法檢測腎臟NGAL、E-cad及HGF的表達(dá)，結(jié)果應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)IPP(Image-Pro Plus)進(jìn)行半定量分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示，各組間比較采用單因素方差分析(滿足正態(tài)性和方差齊性)，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，不滿足正態(tài)性和方差齊性的數(shù)據(jù)資料采用非參數(shù)檢驗(yàn)，應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，以P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：光鏡下觀察各組。腎臟組織

7、HE和Masson染色，顯示隨著輸尿管梗阻時間的延長，腎間質(zhì)占小管間質(zhì)的相對面積及腎間質(zhì)膠原纖維的含量逐漸增加，提示腎間質(zhì)纖維化程度逐漸加重；和UUO組相比，對應(yīng)的pHGF組腎臟組織病理學(xué)變化較輕。結(jié)合IPP圖像分析系統(tǒng)分析免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：NGAL主要表達(dá)于近端腎小管胞漿中；NGAL在Sham組各時期均未見陽性表達(dá)；UUO組和pHGF組中NGAL于術(shù)后第1天即均有表達(dá)，在UUO組第4、7天逐漸升高，至第14天表達(dá)下降；NGAL

8、在pHGF組第4天表達(dá)最高，第7、14天逐漸下降；第14天NGAL在UUO組和pHGF組僅有極少量表達(dá)；第4、7天NGAL在pHGF組高于UUO組同期的表達(dá)。E-cad主要表達(dá)于遠(yuǎn)端腎小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜上；E-cad在Sham組各時期均有明顯表達(dá)，在第4、7、14天三組之間的表達(dá)水平比較為：Sham組>pHGF組>UUO組(P<0.05)；隨著輸尿管梗阻時間延長UUO組和pHGF組的表達(dá)逐漸降低。HGF主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞、腎小球

9、系膜細(xì)胞，在Sham組各時期表達(dá)微弱，在UUO組和pHGF組的表達(dá)隨著輸尿管梗阻時間延長逐漸升高，同期三組之間表達(dá)水平比較為：pHGF組>UUO組>Sham組(P<0.05)。NGAL和HGF的IOD值之間存在直線相關(guān)性(r=0.726，P<0.05)。
　　結(jié)論：單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎臟早期HGF和NGAL表達(dá)升高；pHGF能夠上調(diào)腎臟HGF的水平，維持E-cad的表達(dá)及促進(jìn)NGAL的表達(dá)，減輕單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎臟間質(zhì)纖維化的程