綠色熒光蛋白示蹤檢測(cè)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植在CIA大鼠體內(nèi)的遷移、定植和分布.pdf

1、目的：
　　GFP標(biāo)記的BM-MSCs通過體外培養(yǎng)、擴(kuò)增后移植到CIA大鼠體內(nèi)，通過光學(xué)成像聯(lián)合免疫組化的方法檢測(cè)其在CIA大鼠免疫器官以及關(guān)節(jié)部位的遷移、定植和分布情況，探討其修復(fù)損傷的可能機(jī)制。
　　方法：
　　1.對(duì)GFP標(biāo)記的MSCs進(jìn)行體外培養(yǎng)、擴(kuò)增及鑒定。
　　2.將II型膠原與完全弗氏佐劑的混合制劑間隔14天兩次免疫Wistar大鼠，從大鼠癥狀（大體觀、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、后肢腫脹程度）、影像學(xué)、病理學(xué)方面

2、進(jìn)行評(píng)估，建立CIA大鼠模型。隨機(jī)分為早期干預(yù)組（n=20）、晚期干預(yù)組（n=20），同時(shí)設(shè)置CIA早期對(duì)照組（n=12）、晚期對(duì)照組（n=12）和正常對(duì)照組（n=12）。
　　3.尾靜脈途徑移植GFP-MSCs，小動(dòng)物活體成像技術(shù)動(dòng)態(tài)觀察移植MSCs在大鼠體內(nèi)的遷移過程。
　　4.于3、11、30和42天將各組大鼠的脾臟、胸腺、淋巴結(jié)和關(guān)節(jié)組織作成病理切片，通過免疫組化的方法檢測(cè)移植細(xì)胞在免疫器官和炎癥關(guān)節(jié)部位的遷移和分布

3、。
　　結(jié)果:
　　1.（1）早、晚期干預(yù)組關(guān)節(jié)炎指數(shù)、關(guān)節(jié)腫脹程度較CIA對(duì)照組明顯下降(P＜0.05)；
　　(2)早期干預(yù)組與晚期干預(yù)組比較，關(guān)節(jié)炎指數(shù)與關(guān)節(jié)腫脹程度降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.小動(dòng)物活體成像技術(shù)未能動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)到MSCs移植在CIA大鼠體內(nèi)的遷移過程，動(dòng)物自身熒光干擾明顯。
　　3.抗GFP免疫組化法在干預(yù)組大鼠免疫器官和關(guān)節(jié)部位成功檢測(cè)到GFP陽性結(jié)果，并可持續(xù)存