大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)移植在CIA大鼠中定植與分布的研究.pdf

1、目的：通過對RA動物模型大鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)的實(shí)驗(yàn)研究，探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)在CIA大鼠脾臟、胸腺和關(guān)節(jié)等臟器的遷移、定植和分布，為臨床應(yīng)用間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。 方法： 1．共聚焦熒光顯微鏡檢測MSCs移植在CIA大鼠體內(nèi)的分布：從Wistar大鼠骨髓腔分離大鼠MSCs，體外培養(yǎng)、純化及傳代，熒光染料PKH26和Brdu標(biāo)記MSCs后，經(jīng)大鼠尾靜脈

2、移植入體內(nèi)，分別在不同時期(早、晚期)和不同時點(diǎn)(3、11、30和42天)后處死大鼠，取脾臟、胸腺及關(guān)節(jié)組織，脾臟和胸腺組織制作冰凍切片，關(guān)節(jié)組織經(jīng)脫鈣后制作石蠟切片。通過激光共聚焦熒光顯微鏡來觀測PKH26陽性細(xì)胞(即MSCs)的分布情況。 2．HE染色觀察關(guān)節(jié)組織的病理結(jié)構(gòu)變化：對關(guān)節(jié)組織的石蠟切片做HE染色，通過觀測正常陰性對照組、CIA大鼠未移植MSCs對照組和CIA大鼠移植MSCs治療組(即早期組和晚期組)各組大鼠關(guān)節(jié)

3、的病理結(jié)構(gòu)變化，從病理角度說明MSCs對CIA大鼠的治療作用。 3．免疫組化方法檢測MSCs移植在CIA大鼠關(guān)節(jié)中的分布：在不同時期(早、晚期)和不同時點(diǎn)(3、11、30和42天)留取大鼠踝關(guān)節(jié)，制作石蠟切片。用免疫組化方法檢測經(jīng)Brdu標(biāo)記的MSCs在關(guān)節(jié)中的分布。 結(jié)果： 1．共聚焦熒光顯微鏡檢測MSCs移植在CIA大鼠體內(nèi)的分布：在激光共聚焦熒光顯微鏡下，早晚期組脾臟、胸腺在3天和11天可見多數(shù)骨髓MSCs

4、，呈團(tuán)狀或散在分布，并以早期組居多；30天較多，42天減少。 關(guān)節(jié)組織MSCs分布較少，可能與關(guān)節(jié)組織制作石蠟切片經(jīng)酒精脫蠟，PKH26熒光淬滅有關(guān)。下一步免疫組化實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步論證。 2．HE染色觀察關(guān)節(jié)組織的病理結(jié)構(gòu)變化：CIA模型組大鼠的滑膜層次增多，排列紊亂，大量炎性細(xì)胞浸潤，軟骨、骨組織嚴(yán)重侵蝕；MSCs治療組滑膜炎癥、軟骨及骨組織侵蝕明顯改善，基本無炎性細(xì)胞浸潤。 3．免疫組化法檢測MSCs移植在CIA大