運(yùn)動和黃芪多糖聯(lián)用對骨髓抑制大鼠造血微環(huán)境的影響.pdf

1、研究目的：通過對骨髓抑制大鼠造模、運(yùn)動訓(xùn)練及黃芪多糖干預(yù)，觀察運(yùn)動和黃芪多糖對骨髓抑制大鼠造血細(xì)胞增殖和動員作用，明確運(yùn)動訓(xùn)練和黃芪多糖聯(lián)用促進(jìn)成骨分化抑制成脂分化，進(jìn)而改善骨髓抑制大鼠造血微環(huán)境，并試圖解釋改善造血微環(huán)境的微觀機(jī)理。
　　研究方法：6周齡雄性SD大鼠，隨機(jī)篩選分為5組(每組9只)：1組：對照組(Sedentary)、2組：骨髓抑制組（CTX）、3組：抑制＋黃芪組（CTX+APS）、4組：抑制＋運(yùn)動組（CTX+Ex

2、）、5組：抑制＋黃芪+運(yùn)動組（CTX+APS+Ex）。骨髓抑制造模方法：以30mg/kg/d劑量連續(xù)腹腔肌注環(huán)磷酰胺（Cy）6d。運(yùn)動訓(xùn)練方案：從第一次注射Cy一小時后開始，在ZH-PT型跑臺上運(yùn)動,6d/W,周日休息。1W:10m/min，20min/d，2W:14m/min，30min/d，3W:17m/min，30min/d。第四、五、六周重復(fù)第一、二、三周。N、CTX、CA組放在跑臺上在同一日用相同的方法干預(yù)但不進(jìn)行運(yùn)動。中藥干

3、預(yù)方案：造模成功后第二天起，以500mg/kg/d劑量連續(xù)灌胃黃芪多糖液5d。在末次訓(xùn)練結(jié)束24小時后用20％烏拉坦（5ml/kg）麻醉大鼠，腹主動脈取血入無菌真空抗凝采血管約1ml測其外周血細(xì)胞數(shù)目的變化檢測外周血造血干細(xì)胞（CD90+CD45-）數(shù)量變化；再腹主動脈血入無菌真空非抗凝采血管約3ml，37℃水浴30min，3000r/min離心20min，EP管分裝血清，-20℃冷凍保存，測其EPO、IL-3變化。取去除紅細(xì)胞后的骨髓

4、單個核細(xì)胞懸液，按1x104/孔接種于完全甲基纖維素培養(yǎng)基，進(jìn)行紅系造血祖細(xì)胞培養(yǎng)分別計(jì)數(shù)晚期紅系祖細(xì)胞（CFU-E）和早期紅系祖細(xì)胞（BFU-E），并拍照；調(diào)整大鼠骨髓單個核細(xì)胞濃度為1x106個細(xì)胞加入10ulFITC標(biāo)記的大鼠抗大鼠CD45抗體，對照管加入等量 PBS，混勻后置于4℃避光反應(yīng)30min。向待測液中加入紅細(xì)胞裂解液1ml，充分混勻后避光反應(yīng)5min，在離心機(jī)上以2000r/min離心5min后棄上清液，加入0.5ml

5、PBS重懸，上流式細(xì)胞儀檢測（CD90+CD45-）。取10%多聚甲醛固定大鼠股骨，脫鈣，常規(guī)石蠟包埋切片，二甲苯脫蠟，LEICA骨切片機(jī)連續(xù)切片4-6張，厚度8微米，常規(guī)HE染色，統(tǒng)計(jì)脂肪細(xì)胞的含量百分比，并用SPSS17.0 for Windows進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)。
　　研究結(jié)果：
　　1、外周血參數(shù)值檢測結(jié)果顯示，經(jīng)Cy腹腔注射造模后，CTX組的WBC、RBC、PLT與Sed組比較，仍處于較低水平，差異具有顯著性P＜0

6、.01,表明骨髓抑制動物模型造模成功;檢測結(jié)果還顯示CAE對紅細(xì)胞數(shù)目的提升作用顯著，其它細(xì)胞數(shù)目變化不明顯。單純的中藥組CA比單純的訓(xùn)練組CE對WBC、PLT促進(jìn)作用明顯，但并未達(dá)到顯著性。
　　2、CFU-E：CTX與S比較P＜0.01，說明模型組，經(jīng)化療后，不做任何處理，干細(xì)胞紅系集落仍處于較低水平。CAE組與CTX、CE組比較P＜0.01，說明運(yùn)動和黃芪多糖聯(lián)用對骨髓抑制大鼠紅系集落形成單位集落產(chǎn)率有明顯的刺激作用。在六周

7、的實(shí)驗(yàn)周期里，單純的中藥組對BFU-E的提升作用顯著，CTX、CA、CE組中BFU-E和CFU-E的量都明顯低于正常組。
　　3、在大鼠干預(yù)六周后BM細(xì)胞與PB細(xì)胞中，與正常組S比較，CTX組CD90+CD45-細(xì)胞百分率呈明顯減少趨勢(P＜0.01)。第6周，CA、CE、CAE組 BM細(xì)胞中CD90+CD45-細(xì)胞百分率明顯高于 CTX組,CE、CAE組與單純的中藥組比較發(fā)現(xiàn)，有運(yùn)動干預(yù)的CE、CAE組中CD90+CD45-細(xì)胞

8、百分率明顯的要高于單純的中藥組。第6周，CA、CE組PB細(xì)胞中CD90+CD45-細(xì)胞百分率明顯高于CTX組，而CAE組的P＜0.01，具有非常顯著性差異。
　　4、CE、CAE血清EPO的量顯著高于S組（CE組P＜0.01、CAE組P＜0.05)。CA、CE、CAE組大鼠血清EPO顯著高于CTX(P<0.05)。CA、CE、CAE組大鼠血清IL-3明顯高于S(P<0.05)，CE、CAE組大鼠血清IL-3明顯高于CTX組。

9、>　　5、脛骨HE切片發(fā)現(xiàn),與正常組比較CTX、CA、CE、CAE中骨髓脂肪含量都明顯高于正常組 P＜0.05，與抑制組比較 CA、CE、CAE中骨髓脂肪含量都顯著低于抑制組（CA、CE組P＜0.05，CAE組P＜0.01），與單純的運(yùn)動組比較CAE組骨髓脂肪含量又明顯低于運(yùn)動組，P＜0.05。
　　結(jié)論：
　　1、本研究從造血細(xì)胞存活、增殖、造血生長因子（EPO、IL-3）、骨組織形態(tài)學(xué)等方面對運(yùn)動和黃芪多糖聯(lián)用在造血調(diào)控

10、方面的作用及機(jī)制進(jìn)行了研究，證實(shí)對運(yùn)動和黃芪多糖聯(lián)用對Cy所致骨髓抑制具有一定緩解作用，比單純的中藥對骨髓抑制大鼠造血功能恢復(fù)作用效果更佳。
　　2、本研究結(jié)果顯示運(yùn)動和黃芪多糖聯(lián)用對骨髓抑制大鼠造血調(diào)控可能是多途徑、多層次的。一方面運(yùn)動訓(xùn)練加速血細(xì)胞的新陳代謝，運(yùn)動和黃芪多糖同時具有動員造血干細(xì)胞的增殖分化能力；另一方面運(yùn)動訓(xùn)練通過刺激基質(zhì)細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞分泌EPO、IL-3等多種細(xì)胞因子協(xié)調(diào)作用，此外，運(yùn)動訓(xùn)練可以促進(jìn)骨髓成骨