隱匿性HBV感染者PBMC內(nèi)HBVDNA檢測(cè)及HBVS區(qū)基因變異分析.pdf

1、背景：HBsAg 陽(yáng)性是HBV 感染的重要證據(jù)。然而臨床上還存在大量HBsAg 陰性肝炎。有研究證實(shí)，在部份血清HBsAg 陰性的個(gè)體，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)可以檢測(cè)出血清和（或）肝組織中HBVDNA，稱之為隱匿性HBV 感染。這種感染可發(fā)生于單個(gè)或者多個(gè)抗體陽(yáng)性者，也可見(jiàn)于乙肝病毒血清學(xué)標(biāo)志物（HBVM）均陰性的個(gè)體。隱匿性HBV 感染同樣可以通過(guò)輸血、器官移植、血液透析、母嬰垂直等途徑傳播，也會(huì)導(dǎo)致多種后果。例如：乙肝疫苗免

2、疫失敗、暴發(fā)性肝衰竭、慢性肝損害、與HCV 重疊感染加重病情、導(dǎo)致肝細(xì)胞癌的發(fā)生等。
　　 目的：1、探討不明原因肝病患者血清中與PBMC內(nèi)HBVDNA的感染情況，判斷兩種檢測(cè)方式對(duì)隱匿性HBV 感染的診斷意義；
　　 2、研究隱匿性HBV 感染者HBV S 區(qū)基因變異情況，分析隱匿性HBV感染發(fā)生的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　 方法：選擇不明原因肝病患者76例，分離患者血清及PBMC，分為血清組與PBMC組，采用巢式

3、PCR分別檢測(cè)兩組HBVDNA，陽(yáng)性者結(jié)合臨床資料分析，血清組陽(yáng)性者測(cè)序HBV S基因序列，分析變異位點(diǎn)。
　　 結(jié)果：（1）血清組和PBMC組HBVDNA 陽(yáng)性率分別為21.05％(16/76)和9.21％（7/76），兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，血清組陽(yáng)性率高于PBMC組。（2）1例患者血清HBVDNA 陰性，但PBMC內(nèi)HBVDNA 陽(yáng)性。（3）7例PBMC內(nèi)HBVDNA 陽(yáng)性者，臨床診斷均為肝硬化。結(jié)合臨床資料發(fā)現(xiàn)，PB

4、MC組陽(yáng)性者肝硬化并發(fā)癥出現(xiàn)幾率高，病情重，合并癥多。（4）血清內(nèi)HBVDNA 陽(yáng)性者隨機(jī)抽取8例測(cè)序，a 決定簇內(nèi)序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，nt574 出現(xiàn)A→T的突變，推導(dǎo)氨基酸無(wú)變化；nt587 出現(xiàn)G→A的突變，推導(dǎo)至氨基酸甘氨酸變異為精氨酸,即較為常見(jiàn)的G145R 突變。A 決定簇外基因序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，nt355，nt484 堿基均由A→C,推導(dǎo)氨基酸無(wú)變化，nt512堿基由C→A，推導(dǎo)氨基酸由脯氨酸變異為蘇氨酸。
　　 結(jié)論：1、