燒干蟾水提物對人結腸癌細胞系SW480抑制與凋亡的初步研究.pdf

1、目的：觀察燒干蟾水提物（ water soluble extract components of roast Toad， WSECRT）對人結腸癌細胞株SW480細胞增殖及凋亡情況的影響；檢測燒干蟾水提物對SW480細胞細胞周期的影響，并對其誘導凋亡的相關作用機制進行初步探討。
　　方法：設置陰性對照組、華蟾素陽性對照組與WSECRT實驗組，以不同濃度的藥物作用于結腸癌細胞株SW480，應用倒置顯微鏡觀察藥物對SW480細胞形態(tài)學

2、的影響；應用噻唑藍還原法（MTT）檢測藥物對結腸癌細胞株SW480細胞增殖的抑制作用；應用Hoechst33342熒光染料檢測藥物對SW480細胞干預后的凋亡情況；應用AnnexinV/PI雙染色法檢測WSECRT干預SW480后細胞凋亡及壞死的情況；應用流式細胞術分析 SW480細胞經(jīng)WSECRT作用后其周期分布情況的變化。統(tǒng)計學方法：所有數(shù)據(jù)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行處理，計量資料采用均數(shù)±標準誤（mean±S.M.E）表示。采

3、用t檢驗及單因素方差分析（Fisher's LSD test）進行統(tǒng)計學分析。所有統(tǒng)計分析P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：（1）經(jīng) WSECRT與華蟾素處理后，SW480細胞在10×20倍光鏡下的形態(tài)學觀察可見細胞數(shù)目減少，形態(tài)變圓，出現(xiàn)偽足，細胞內(nèi)空泡和顆粒增多，出現(xiàn)大量細胞碎片。（2）WSECRT與華蟾素可顯著抑制SW480細胞增殖分裂，相應濃度下WSECRT的抑制作用較華蟾素更為明顯。WSECRT0.01、0.

4、05、0.25、1.25、6.25mg/ml作用24h、48h、72h的半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為4.194mg/ml、3.064mg/ml與1.710mg/ml，華蟾素0.001、0.005、0.025、0.125、0.625μg/ml作用24h、48h、72h后的IC50（以5-HT計）分別為0.971μg/ml、0.339μg/ml、0.253μg/ml。（3）Hoechst33342染色結果顯示W(wǎng)SECRT處理的SW480細

5、胞核藍染顏色明顯加深，出現(xiàn)染色質(zhì)凝聚和凋亡小體。（4）流式細胞儀檢測顯示，細胞凋亡與WSECRT呈濃度和時間依賴關系，隨著濃度的增加及時間的延長細胞凋亡比例明顯增加，與陰性對照差異有統(tǒng)計學意義（*P<0.01）。（5）流式細胞儀檢測顯示細胞周期發(fā)生明顯改變，細胞分裂阻滯在S期，與陰性對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（*P<0.01）。
　　結論：
　　（1）WSECRT與華蟾素都可抑制SW480細胞增殖，其抑制程度與時間、劑量呈依