miR743a轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控WT1影響后腎間充質(zhì)細(xì)胞增殖凋亡的實驗研究.pdf

1、目的：
　　1.尋找可靶向結(jié)合腎母細(xì)胞瘤抑制基因1（WT1）的潛在miRNA，并闡明其結(jié)合WT1后的效應(yīng)；
　　2.研究miR743a對后腎間充質(zhì)細(xì)胞增殖、凋亡能力的影響。
　　方法：
　　1.應(yīng)用熒光素酶報告分析實驗，分析miR743a靶向結(jié)合WT1的3'UTR的能力；
　　2.應(yīng)用熒光定量PCR分析及免疫印跡實驗，比較抑制WT1上miR743a結(jié)合位點前后WT1在mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化；
　

2、　3.應(yīng)用EDU增殖實驗及WT1 rescue實驗，研究miR743a對后腎間充質(zhì)細(xì)胞增殖能力的影響；
　　4.應(yīng)用細(xì)胞凋亡實驗及WT1 rescue實驗，研究miR743a對后腎間充質(zhì)細(xì)胞凋亡能力的影響；
　　5.所有的樣品檢測三次。所有的結(jié)果均為平均值±SD和進(jìn)行配對t檢驗。我們使用GraphPad Prism5軟件（GraphPad，圣地亞哥，CA， USA）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，得到柱狀圖。 P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。