一種新的Th2高表達蛋白——嗜中性顆粒蛋白(NGP)的表達、純化及其性質與功能初探.pdf

1、CD4+T細胞根據(jù)其所分泌的細胞因子的不同,可以分成兩個亞類:Th1細胞和Th2細胞。Th1細胞主要分泌INF-γ、IL-2、TNF-α和TNF—β,對于細胞內病原體例如單核細胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)和利什曼原蟲(Leishmania major)的清除十分重要；而Th2細胞主要分泌IL-4、IL-13、IL-5、IL-6、IL-10和IL-9,從而誘導體液反應去清除腸內蠕蟲和線蟲等寄生蟲。體內

2、Th1和Th2的平衡在維護機體免疫狀態(tài)平衡、調節(jié)生理機能、防御感染、監(jiān)視腫瘤等多方面具有重要的意義。若朝向Th1分化的細胞過量,將導致自身免疫性疾病的發(fā)生；反之,若Th2過于活躍,則會導致過敏和哮喘的發(fā)生。
　　 盡管近幾年人們對輔助性T細胞分化的認識有了很大的提高,但仍然存在一些問題。我們實驗室應用高通量基因芯片技術對Th1和Th2的基因表達譜進行了研究,結果發(fā)現(xiàn)了一種新的Th2高表達基因——嗜中性顆粒蛋白(NGP)基因；并且

3、通過RT—PCR、實時定量PCR進一步確認NGP的確在Th2細胞中的高表達。由此推斷NGP可能在輔助性T細胞的分化中發(fā)揮某種功能。將NGP克隆入質粒pEGFP—N1后,利用激光共聚焦熒光顯微鏡技術,發(fā)現(xiàn)融合表達的NGP—GFP定位于細胞質中,并且轉染了NGP—pEGFP—N1的293T細胞的上清液可以抑制OVA誘導的小鼠脾細胞的增殖。為了進一步對NGP進行功能研究,表達純化了NGP—GST融合蛋白,同時制備了抗體。經(jīng)過westernbl