一種新的分泌蛋白基因NSP019的克隆和表達(dá)的研究.pdf

1、目的:克隆一種新的分泌蛋白基因,對其生物學(xué)特性進(jìn)行研究,為開發(fā)具有中國自主知識產(chǎn)權(quán)的有功能意義的新藥奠定基礎(chǔ).方法:該研究應(yīng)用生物信息學(xué),尋找到一種新的分泌蛋白基因NSP019.通過引物設(shè)計(jì),用PCR方法,從人腦垂體cDNA庫中克隆到此基因,在與載體連接后,經(jīng)核酸測序再分別導(dǎo)入原核和真核細(xì)胞進(jìn)行表達(dá),運(yùn)用Western blot、Northern blot及亞細(xì)胞定位等方法,對克隆到的一種新的分泌蛋白基因NSP019及其表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行研究

2、.結(jié)果:生物信息學(xué)分析顯示,NSP019基因含5716個(gè)堿基,開放閱讀框架為726個(gè)堿基,翻譯成共241個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì),預(yù)計(jì)分子量約為27KD.通過SignalP、ScanProsite、CD-Search等軟件分析,發(fā)現(xiàn)NSP019蛋白N-端有一段長度為32個(gè)氨基酸的疏水信號肽,并且含有一個(gè)谷胺酰胺富集區(qū).定位在第二號染色體上,含有五個(gè)外顯子.我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,NSP019基因ORF為726bp,編碼241個(gè)氨基酸,與生物信息學(xué)預(yù)

3、測相符.Western blot及亞細(xì)胞定位證明NSP019基因編碼的產(chǎn)物為一種分泌蛋白,Northern blot顯示其在人體多組織均見表達(dá).NSP019基因在原核系統(tǒng)中亦能表達(dá),主要形成包涵體.通過GST系統(tǒng)我們得到了NSP019的純化蛋白.結(jié)論:該研究證實(shí)我們所克隆的NSP019是一個(gè)新的具有分泌性的蛋白基因(GenBank的登錄號:Accession NO.AF361495).NSP019蛋白與細(xì)胞發(fā)育、胞內(nèi)蛋白的調(diào)控有關(guān),可能