PML-NBs蛋白細胞內防御機制研究和克隆一種新的Bax異構體.pdf

1、本論文首先探討了PML-NBs作為細胞內防御系統(tǒng)在對抗外界干擾如整合酶以及病毒感染過程中發(fā)揮的作用，并選擇了噬菌體整合酶ΦBT1和腺病毒分別作為抗整合和抗病毒研究的對象。
　　噬菌體整合酶ΦBT1因其具有可介導轉基因位點特異性整合的能力而成為了基因治療中一種潛在的工具，它豐富了轉基因載體的選擇，并使得多位點特異性整合成為可能。研究中發(fā)現(xiàn)，ΦBT1整合酶中四個氨基酸433RFAL436對整合酶與PML-NBs蛋白Daxx的結合起到了

2、關鍵作用。通過進一步構建并利用ΦBT1整合酶哺乳動物細胞報告系統(tǒng)，我們證實了過表達Daxx會抑制ΦBT1整合酶在293T細胞中的重組效率。本研究首次報道了細胞內的蛋白可以與ΦBT1整合酶發(fā)生相互作用并抑制其重組活性。該結果對于改善ΦBT1整合酶介導的轉基因操作以及選擇ΦBT1整合酶靶細胞方面具有重要的參考意義。
　　E1B55K是腺病毒的早期蛋白，可與p53相互作用并介導p53的降解。p53的失活對促進腺病毒DNA復制具有重要意義

3、。先前的研究表明，腺相關病毒AAV可通過保護p53不被E1B55K介導的泛素化途徑降解來削弱腺病毒的轉化能力，但是具體細節(jié)并不清楚。在本研究中，我們通過免疫共沉淀實驗驗證了腺相關病毒蛋白Rep78與p53之間的相互作用，并證實Rep78可抑制E1B55K對p53的胞質輸出和降解。Rep68不能和p53結合，且對E1B55K的抑制作用較弱。但Rep78不能消除E1B55K與p53的結合，對應的，p53的轉錄激活活性也不能得到恢復。此外，被

4、Rep78保留在細胞核內的p53從均勻分布變化為了顆粒狀的分布，而后者與PML-NBs蛋白的經典分布模式類似，提示PML-NBs可能參與了該過程。該研究結果為Rep78，以及PML-NBs對抗腺病毒的模型提出了新的可能。
　　其次我們把目光投向了Bcl-2家族蛋白Bax。Bcl-2家族蛋白是程序性細胞死亡中起關鍵作用的調控因子，并按包含Bcl-2同源結構域（BH1-4）的不同劃分為三大類。按其功能，Bcl-2家族蛋白可分為抗凋亡蛋

5、白和促凋亡蛋白兩種。Bax是具有多個BH結構域的促凋亡蛋白，并在凋亡途徑中起到關卡的作用。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)并克隆到了一種新的Bax的異構體Bax-ω，其與異構體Bax-β相比具有相同的C末端但缺失了N端的78個氨基酸。盡管Bax-ω缺乏了BH3結構域，但仍可引發(fā)強烈的凋亡。而其與Bax-β所共有的，與其他異構體不同的C端對其促凋亡活性具有一定的影響。表達譜分析顯示Bax-ω在多種正常組織中都存在表達。我們的結果表明Bax-ω是一種新