人ITSN2基因新剪接異構體的克隆和鑒定.pdf

1、學校代碼!Q5壘2密級學號200714020039人ITSN2基因新剪接異構體的克隆和鑒定Cloneandidentificationandofanewisoformofgene，指導教師姓名、職稱堂焦整撞魚墨鹽塾撞湖南師范大學學位評定委員會辦公室二零一零年五月摘要Intersectin家族成員ITSNl和ITSN2，都是有廣泛表達的蛋白。它們都有2個EH結構域、一個CC結構域和5個連續(xù)的SH3結構域，通過選擇性剪接具有2個主要的轉錄本

2、。一個短的轉錄本S和一個在C端依次增加了編碼DH、PH和C2結構域的長轉錄本L。相對于ITSNl，ITSN2在組織表達中更有普遍性。研究表明ITSN主要在網格蛋白介導的內吞過程中起到支架蛋白的作用。TNFAIPI是一個受腫瘤壞死因子Q(TNFQ)誘導表達的即早基因，為了研究TNFAIPI的相互作用蛋白，我們以TNFAIPI為誘餌蛋白，使用酵母雙雜交技術篩選人的胚胎腦庫，結果篩選出了ITSN2基因的一段，主要包含EH2和CC兩個結構域。為

3、了進一步研究它們之間的相互作用，我們首先克隆了ITSN2。先克隆前、中、后三部分再連接起來得到ITSN2全長，測序結果顯示相對于ITSN2L缺失了了17號外顯子和36號外顯子的一部分。我們將這一新剪切體命名為ITSN2M。分析顯示ITSN2一M的前期讀碼結構沒有改變，但在36號缺失后產生了一個終止密碼子。因為17號外顯子的缺失，位于中間的CC結構域被破壞；而36號外顯子缺失導致翻譯終止，影響了PH和C2結構域。說明這種不同于ITSN2一