UHRF2在羥基脲所致的DNA損傷應(yīng)答中的作用研究.pdf

1、目的：研究 UHRF2與羥基脲所致的 DNA損傷之間的聯(lián)系，以及UHRF2在羥基脲所致的 DNA損傷應(yīng)答中分別與 p53、p21及 H3K9乙?；g的相關(guān)性。進(jìn)一步探討UHRF2的生物學(xué)功能。
　　方法：體外培養(yǎng)HEK293細(xì)胞，構(gòu)建羥基脲（HU）所致的DNA損傷細(xì)胞模型；分別轉(zhuǎn)染pCMV-Flag-NIRF質(zhì)粒及UHRF2-siRNA，采用免疫印跡（ western blot）及 RT-PCR法檢測(cè) pCMV-Flag-NIR

2、F及UHRF2-siRNA在HEK293細(xì)胞中的表達(dá)情況；運(yùn)用單細(xì)胞凝膠電泳檢測(cè)UHRF2與羥基脲誘導(dǎo)的DNA損傷之間的關(guān)系；通過免疫印跡法檢測(cè)DNA損傷應(yīng)答過程中內(nèi)源性UHRF2的表達(dá)情況；利用免疫印跡檢測(cè)UHRF2在DNA損傷應(yīng)答中對(duì)p53、p53下游基因p21及H3K9乙酰化(H3K9ac)的影響；CCK8及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)UHRF2在DNA損傷應(yīng)答中對(duì)細(xì)胞周期及增殖的影響。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組的HEK293細(xì)胞經(jīng)

3、2.5mmol/L羥基脲處理12h后，DNA出現(xiàn)了明顯的損傷，與24h處理組相比無明顯差異；HEK293細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染 pCMV-Flag-NIRF質(zhì)粒及 UHRF2-siRNA后，UHRF2發(fā)生了顯著變化；UHRF2上調(diào)后 DNA拖尾明顯變短(p＜0.01)；p53、p21及H3K9乙?；鞍椎牧匡@著增加(p＜0.05)，細(xì)胞增殖明顯減慢且G1期細(xì)胞增加（p＜0.01）；UHRF2下調(diào)后DNA損傷應(yīng)答中P53、P21及H3K9乙?；鶞p少