銀杏幼苗葉片發(fā)育初期光系統(tǒng)Ⅱ亞基表達水平的分析研究以及psbA基因的克隆.pdf

1、四碩 士 璺．1 1 位 I _ _ ‘_彈 中論 文題 圖：鍛杏幼苗葉片發(fā)育初期光系統(tǒng)j ! 亞基表達水堊煎僉塹毯塞隧壁碰查壘基圈塑囊隧作 者：焦j 凌～完成時間 耋壁壁蔓笙至堡～培養(yǎng)指導單位教籍專 業(yè)研究方向幽劃太～堂一～ 蕉益友夔煎堡翅焦堂皇盆至生毖堂 雖皇重盟望L叫川大學碩十學位論文分積聚水平和相關編碼基因的m R N A 豐度的變化。在葉片發(fā)育早期，葉綠素總量隨著葉片的生長而快速增加，而葉綠素a ／b 的比值卻隨之稍有下降。W

2、 e s t e r nb l o t 免疫印跡顯示，葉綠素a ／b 結合蛋白L H C I I ( 1 i g h t h a r v e s t i n gc o m p l e x s I I ) 和天線蛋白C P 4 3 隨著銀杏幼苗的生長而逐漸增加，然而，其余幾個葉綠素結合蛋白D 1 、D 2 、C P 4 7 的蛋白豐度卻沒有明顯變化。從N o r t h e r n 雜交結果上可以看到，編碼反應中心D 1 蛋白的瑚腳基因在

3、發(fā)芽1 0 天的幼苗中m R N A 水平比發(fā)芽5 天時高出近一倍，而與此同時，細胞核基因c a b 的轉錄本水平卻沒有顯著變化。以上實驗結果暗示：在銀杏幼苗葉片生長初期，隨著葉綠素合成的不斷加快和組分比例的改變，葉綠體的發(fā)育水平會不同程度地影響光系統(tǒng)I I 亞基的代謝水平。最后，編碼光反應中心核心蛋白的p s b A 基因的e D N A 片段從銀杏葉片中克隆出來。p s b A 在進化上非常保守，在許多種類的植物中都已經(jīng)克隆并測序，

4、然而，G e n B a n k 中至今還沒有銀杏p s b A 的序列信息。鑒于銀杏在現(xiàn)代植物分類學上的重要性，本文采用了最簡便的R T - P C R 方法克隆出一長1 0 2 0 b p 的c D N A片段。該片段全部序列都屬于基因O R F 區(qū)域，根據(jù)其核苷酸序列翻譯出的多肽包括了D l 蛋白完整的N 端和幾乎全部的成熟蛋白序列，只有前體蛋白發(fā)生剪切的C 末端1 3 個氨基酸殘基除外。B L A S T 和S W I S S