雞inh各亞基成熟區(qū)cdna的克隆、序列分析以及雞inhα亞基在e.coli中融合表達的研究

1、浙江大學碩士學位論文雞INH各亞基成熟區(qū)cDNA的克隆、序列分析以及雞INH α-亞基在E.coli中融合表達的研究姓名：田錦申請學位級別：碩士專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖指導教師：傅衍20030501A B S T R A C TI n h i b i n s a r eg o n a d a lg l y c o p m t e i nh o r m o n e sc o m p r i s e do f 程一s u b t m i t

2、a n d §- s u b u n i t( B A —a n dp B —s u b u n i t ) l i n k e db y d i s u l f i d eb o n d s ．I n v i v o ，i n h i b i n sh a v eb i o l o g i c a la c t i v i t yi ns u p p r e s s i n g t h e s y n t h e s i s

3、 a n d f e l e a s i n go f F S H f r o m p i t u i t a r y ．T h e e m p h a s i s o f t h i ss t u d y i sf o c u s e d O nc l o n i n ga n df u s i o ne x p r e s s i o no f m a t u r ei n h i b i na ·s u b u n i

4、te D N A o f X i a o s h a nc h i c k e n i n B L 2 1 ( D E 3 ) s t r a i n ．T h ea i mo ft h e p r e s e n ts t u d y i s t o p r o v i d et h e o r e t i c a lf o u n d a t i o n f o r t h e e f f e c to f r e c o m b

5、i n a n t p r o t e i n o n p o u l t r y r e p r o d u c t i o n 。T h et o t a l R N A w a se x t r a c t e df r o mf o l l i c l e g r a n u l o s ac e l l s c o l l e c t e d f r o mc h i c k e no v a r yu s i n gT o

6、t a lR N A E x t r a c t i n gK i t ．T h et o t a lR N A W a S t r a n s c r i p t e dw i t ht h er e v e r s et r a n s c r i p t a s et oo b t a i nt h em a t u r er e g i o ne D N A s e q u e n c e so fX i a o s h a n

7、c h i c k e ni n h i b i ns u b u n i t s ．U s i n gp G E M - T E a S y V e c t o r a n d p U C m —T V e c t o r a s c l o n i n gv e c t o r , w e c l o n e d t h ea - s u b u n i t ，隊一s u b u n i ta n d 陸一s u b u n i t

8、e D N A a n d a n a l y z e dt h e i rs e q u e n c e s u s i n g D N A M A NA p p l i c a t i o ns o f t w a r e a n dC L U S T A LW ( 1 ．6 0 ) M u l t i p l eS e q u e n c eA l i g n m e n t s s o f t w a r e ，c o m p

9、a r e d t h e o b t a i n e d 程一s u b u n i t , §A - S u b n n i t a n d 3 擴s u b u n i t e D N As e q u e n c e s w i t hc o r r e s p o n d i n gs e q u e n c e so f m a m m a l a n d o t h e rc h i c k e n s r e

10、p o r t e di nG e n B a n k ．T h e r e s u l t sr e v e a l e d ，t h em a t u r e 畦·s u b a n i te D N A o f X i a o s h a n c h i c k e n s h o w e d 1 0 0 ％～9 8 ％，7 1 ％～9 8 ％，7 3 ％，7 1 ％，7 1 ％，6 8 ％a n d7 1 ％i d e

11、 n t i t yt ot h a to f t h ec h i c k e n s ( X i a n j uc h i c k e n ，W h i t eL e 曲o mc h i c k e na n do t h e rc h i c k e nG a t h t sg a t t u s ) ，c o w , p i g ，s h e e p ，h o r s e ，m o u s ea n dh u m a n r e

12、 s p e c t i v e l y 。I ti s9 9 ％，8 5 ％，8 3 ％，8 4 ％，8 4 ％，8 5 ％i d e m i c a li nn u c l e o t i d es e q u e n c eb e t w e e n t h ep ”s u b t m i to f X i a o s h a nc h i c k e na n do t h e rc h i c k e n s ，c o w ,

13、 p i g ，s h e e p ，m o u s ea n d h u m a n r e s p e c t i v e l y ．T h em a t u r e & 一s u b u n i te D N A h a s 9 9 ％，8 1 ％，8 1 ％，8 1 ％a n d8 3 ％h o m o l o g yw i t ht h a to ft h ec h i c k e n s ，C O W ) p i g

14、 ，m o u s ea n dh u m a n r e s p e c t i v e l y ．A n dt h er e s u l t sa l s oi n d i e a t e t h a t ，t h e g e n e s o f i n h i b i n s u b u n i t sa r e v e r y c o n s e r v e di ne v o l u t i o n ．A f t e r d

15、i g e s t i n gt h e p o s i t i v ec l o n e o f t h ei n h i b i n m a t u r e n —s u b u n i te D N A ，w e l i n k e di tt ot h ee x p r e s s i n gv e c t o rp E T 3 0 u V e c t o rc u tb yt h es a m ee n z y m e s S

16、 a t I a n d N c o1 ．a(chǎn) n dc o n s t r u c t e d i n h i b i n a - p E T 3 0 a e x p r e s s i o n v e c t o r a n d s c r e e n e d r e c o m b i n a n t , t h e nt r a n s f o r m e di ti n t oB L 2 1 r D E 3 ) s t r a

17、i n ．I n d u c e dt h ee x p r e s s i n gs t r a i nB L 2 1 ( D E 3 ) b y a d d i n gI P T G i n t ot h em e d i u m t op r o d u c et h ep r o t e i no f i n t e r e s ti nl o w e rt e m p e r a t u r e ( 3 0 。C ) ，a n

18、 dp u r i f i e d t h e f u s i o n p r o t e i n b y t h e p r o c e s s o f r e p e a t e d f r e e z i n g a n d t h a w i n g ．T h eS D S - P A G Ee l e c t r o p h o r e s i ss h o w e dt h a t ，w eo b t a i n e d t

19、 h et a r g e t e dp r o t e i n ．T h er e s u l t sf u r t h e r i n d i c a t ei ti sf e a s i b l et oo b t a i n a g r e a t d e a lo f i m m u n e a n t i g e nu s i n g t h i sm e t h o d ．K e yW o r d s ：X i a o s