Tristetraprolin和VEGF家族的表達異常參與腹膜透析大鼠超濾衰竭的發(fā)生.pdf

1、背景與目的：
　　 腹膜透析(PD)是終末期腎病(ESRD)患者長期生存的一種有效的腎臟替代治療方法。但是隨著透析病人腹膜腔長時間接觸非生物相容性透析液，腹膜超濾能力將逐漸下降，最終導(dǎo)致超濾衰竭(UFF)的發(fā)生。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)促使血管新生，使腹膜物質(zhì)轉(zhuǎn)運面積系數(shù)(MTAC)增大，從而導(dǎo)致UFF，這是近年來的研究熱點。同樣淋巴重吸收增加也是UFF的發(fā)生機制之一，VEGF家族中VEGF-C/VEGF-D能夠促淋巴管形成

2、，但關(guān)于PD腹膜中淋巴管新生導(dǎo)致淋巴重吸收增加研究相對較少。Tristetraprolin（TTP,又稱鋅指蛋白-36）作為炎性調(diào)節(jié)因子，在胃腸癌、乳腺癌中發(fā)現(xiàn)可以調(diào)節(jié)VEGF的表達，而在PD腹膜中TTP是否也參與調(diào)控VEGF家族的異常表達，這也未見有研究報道。因此，本實驗采用5/6腎臟切除法制作大鼠尿毒癥模型，并在此基礎(chǔ)上構(gòu)建腹透模型，以此模擬人體尿毒癥環(huán)境及腹腔內(nèi)長期PD環(huán)境，來研究TTP與VEGF家族的表達情況及淋巴管新生是否和血

3、管新生一樣參與了UFF的發(fā)生。
　　 方法：
　　 1.選取清潔級健康SD大鼠40只(180～200g)，5/6大鼠腎臟切除構(gòu)建尿毒癥模型，并在此基礎(chǔ)上建立腹膜透析大鼠模型。
　　 2.實驗組別分為:正常組（n=8只），假手術(shù)組（n=8只），尿毒癥組(n=8只)，PD2周組（n=8只），PD4周組（n=8只）。假手術(shù)組行雙側(cè)腎包膜剔除術(shù);PD組按照按3ml/100gBW從大鼠頸部腹透管注入4.25％腹透液，規(guī)律腹

4、膜透析2周或4周。
　　 3.正常組、PD2周組、PD4周組SD大鼠于處死前，行腹膜平衡實驗(PET)，計算葡萄糖轉(zhuǎn)運量和超濾量。
　　 4.各組SD大鼠處死后取其大網(wǎng)膜和腹膜，大網(wǎng)膜行免疫組化觀察腹膜中VEGF、VEGF-C表達變化，CD31、LYVE-1分別標(biāo)記觀察腹膜組織新生血管密度(MVD)和淋巴管密度(LVD);
　　 5.腹膜組織提取總RNA逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測腹膜中VEGF、VEG

5、F-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、TTP表達水平變化。腹膜組織提取蛋白行Westernblot檢測各組TTP蛋白的表達變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.PET結(jié)果顯示:與正常組相比，PD2周組和PD4周組葡萄糖轉(zhuǎn)運量均增加(P＜0.05)，且PD4周組較PD2周組增加更明顯(P＜0.05)。與正常組相比，PD2周組和PD4周組超濾量均減少(P＜0.05)，且PD4周組較PD2周組減少更明顯(P＜0.05)。

6、
　　 2.與正常組相比，尿毒癥組和PD4周組大鼠腹膜的CD31、LYVE-1蛋白表達均增加(P＜0.05)，且與尿毒癥組相比，PD4周組CD31、LYVE-1蛋白表達增加(P＜0.05)。計算MVD和LVD，與正常組相比，尿毒癥組和PD4周組大鼠腹膜的MVD和LVD均增加(P＜0.05)，且與尿毒癥組相比，PD4周組大鼠腹膜的MVD和口LVD均增加（P＜0.05）。
　　 3.與正常組相比，尿毒癥組大鼠VEGF、VEG

7、F-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-DmRNA表達均明顯增加(P＜0.05)，且PD4周組大鼠的表達量較尿毒癥組亦明顯上升(P＜0.05)。
　　 4.與正常組相比，尿毒癥大鼠TTP蛋白表達減少(P＜0.05)，而與尿毒癥組比較，PD4周組大鼠TTP蛋白表達明顯減少(P＜0.05).
　　 4.與正常組比較，2周PD組VEGF、VEGF-CmRNA和VEGF、VEGF-C蛋白表達增加(P＜0.05)，4周PD組