腹膜透析大鼠腹膜結(jié)締組織生長因子的表達及意義.pdf

1、腹膜透析(PD)是治療終末期腎臟疾病(ESRD)的有效方法之一，國內(nèi)外大量數(shù)據(jù)表明持續(xù)性非臥床腹膜透析(CAPD)與血液透析(HD)一樣有效，甚至有一些獨特的優(yōu)越性，因此現(xiàn)在有許多學者提出，PD應作為ESRD的首選透析方式。 腹膜纖維化致超濾喪失是CAPD患者退出腹膜透析治療的主要原因之一。轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)是目前公認的作為腹膜纖維化病變中最重要的促發(fā)因子之一，曾有許多研究從不同角度直接阻斷TGF-β1的表達或活

2、性，可以減少細胞外基質(zhì)(ECM)的積聚，從而減輕組織纖維化，但是TGF-β1除了致纖維化作用外，還是免疫功能和腫瘤生長的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，單純阻斷TGF-β可能到抗組織纖維化的同時，也會帶來多種嚴重副反應，在臨床應用受到限制。 結(jié)締組織生長因子(CTGF)是一種新發(fā)現(xiàn)的生長因子，屬于即刻早期基因CCN(CTGF，cyr61，nov)家族成員。CTGF作為重要的前纖維化標志以及TGF-β1的下游效應介質(zhì)，與TGF-β1一起參與了眾多組

3、織的ECM合成。CTGF主要介導TGF-β的負面效應，而其正面效應卻不由CTGF途徑介導，因此，CTGF是今后抗組織纖維化治療研究的一個比較理想的作用靶點。最近的研究報道PD患者腹腔透出液中可檢測到CTGF，人類腹膜間皮細胞(HPMCs)表達CTGF，TGF-β刺激使HPMCs合成CTGF增加。因此，CTGF可能參與了長期PD過程中PF的形成。 目前CTGF在PD腹膜纖維化中的研究還主要在體外細胞實驗，國內(nèi)外尚未報道CTGF在P

4、D腹膜中的表達及其與腹膜纖維化的關(guān)系。本研究在腹膜透析大鼠中，觀察CTGF在腹膜的表達情況及其與腹膜纖維化的關(guān)系，初步討論CTGF在葡萄糖透析液對腹膜損害中的作用。 目的：觀察CTGF在腹膜透析大鼠模型腹膜中的表達情況，及其與腹膜纖維化的幾個主要指標TGF-β1、纖維連接蛋白(FN)、膠原厚度的相關(guān)性，闡明CTGF在PD腹膜纖維化中的作用。 方法：采用雄性成年SD大鼠28只(體重200-240g)，隨機分為4組，分別是正

5、常對照組(n=7，未予任何處理)、生理鹽水組(n=7，每日腹腔內(nèi)直接注射0.9％生理鹽水20m1)、低糖組(n=7，每日腹腔內(nèi)直接注射1.5％含糖透析液20m1)、高糖組(n=7，每日腹腔內(nèi)直接注射4.25％含糖透析液20ml)、各組在觀察4周后，測定腹膜的超濾功能，腹膜平衡試驗(PET)，然后處死大鼠，取上腹壁層腹膜標本，制片后HE及VG法染色光學顯微鏡觀察，鏡下測量腹膜膠原厚度。通過免疫組織化學方法檢測大鼠腹膜組織中CTGF、TGF

6、-β1、FN蛋白的表達并分析其相互關(guān)系。從各組的壁層腹膜中提取RNA，采用RT-PCR技術(shù)測定各組腹膜CTGF、TGF-β1 mRNA的表達并分析其關(guān)系。 結(jié)果： 1、不同組別腹膜超濾功能的測定結(jié)果 低糖、高糖組與空白對照組，生理鹽水組相比較，超濾量均顯著下降，P<0.05；高糖組與低糖組比較，其超濾量明顯減少，P<0.05。 2、不同組大鼠的腹膜平衡試驗結(jié)果 D／Pcr的比較：高糖組比正常對照、

7、生理鹽水組升高，P<0.05。其余組之間兩兩比較無顯著差異，P>0.05。 D／D<,o>的比較：高糖組比正常對照組、生理鹽水組明顯下降，P<0.05。低糖組比空白對照組低，P<0.05；其余組之間兩兩比較無顯著差異，P>0.05。 3、腹膜膠原厚度比較 高糖組腹膜膠原厚度比與其余各組均增厚，P<0.05；低糖組比正常對照組增厚，P<0.05；其余組之間兩兩比較無顯著差異，P>0.05。 4、免疫組織化

8、學方法檢測大鼠腹膜組織ePCTGF、TGF-β1、FN的表達量 高糖組CTGF、TGF-β1、FN蛋白表達水平顯著高于其他各組，P<0.05；低糖組顯著高于正常對照組、生理鹽水組，P<0.05。相關(guān)分析示CTGF蛋白表達量與TGF-β1、FN蛋白表達量、腹膜膠原厚度均呈正相關(guān)，P<0.05。 5、不同組別大鼠腹膜中CTGF、TGF-β1mRNA的表達 在正常對照以及生理鹽水對照組中，TGF-β 1、CTGFmRN

9、呈低水平表達。TGF-β1、CTGFmRNA在高糖組中表達最高，P<0.05。相關(guān)分析示兩者呈正相關(guān)。 結(jié)論： 1、在腹膜透析大鼠中，腹膜透析液、尤其是高濃度葡萄糖透析液能促進腹膜的纖維化，損害腹膜的溶質(zhì)轉(zhuǎn)運及超濾功能。 2、腹膜透析液、尤其是高糖腹膜透析液能上調(diào)大鼠腹膜中TGF-β1的表達，促進腹膜的纖維化。 3、腹膜透析液、尤其是高糖腹膜透析液，能明顯上調(diào)大鼠腹膜中CTGF的表達水平，CTGF